[发明专利]一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法、试剂盒及其应用有效
| 申请号： | 202110476983.6 | 申请日： | 2021-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN113186248B | 公开（公告）日： | 2022-04-29 |
| 发明（设计）人： | 吴曈勃;涂博成;肖先金;冯子珊 | 申请（专利权）人： | 华中科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/34 | 分类号： | C12Q1/34;C12Q1/44;C12Q1/6818 |
| 代理公司： | 北京金智普华知识产权代理有限公司 11401 | 代理人： | 蓝晓玉 |
| 地址： | 430074 湖北*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 背景 信号 抑制 探针 氧代鸟 嘌呤 dna 糖基化酶 测定 方法 试剂盒 及其 应用 | ||
1.一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，所述测定方法为非诊断目的的测定方法，其特征在于，包括：
将λ exo 缓冲液、含有荧光基团及猝灭基团的报告探针序列、含有8-氧代鸟嘌呤的背景信号抑制探针序列混合；背景信号抑制探针在8-氧代鸟嘌呤位点处被切割后，与报告探针在5’-荧光基团末端形成2-nt突出结构；
将混合液加热后逐渐冷却，之后，加入待测样品孵育；
孵育结束后加入λ exo，进行酶切反应，之后进行荧光检测。
2.根据权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，其特征在于，所述含有荧光基团及猝灭基团的报告探针序列为：荧光基团-CCTCCACAGACACATAC-猝灭基团。
3.根据权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，其特征在于：所述荧光基团为FAM 荧光基团、HEX 荧光基团或 VIC 荧光基团中的任一种。
4.根据权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，其特征在于：所述猝灭基团为 BHQ-1 猝灭基团、BHQ-2 猝灭基团和 BHQ-3 猝灭基团中的任一种。
5.根据权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，其特征在于：所述含有8-氧代鸟嘌呤的背景信号抑制探针序列为TTATGGAGTATGTGTCTGTGGAoxoGGGTCGAGGTTTTTTTTTTCCTCGACCCTCCACAGACA，oxoG为8-氧代鸟嘌呤。
6.根据权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法，其特征在于：将混合液加热至85°C，然后逐渐冷却至37°C，加入待测样品；在37℃下孵育；孵育时间为30min。
7.如权利要求1所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定方法在8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定中的应用；所述应用为非诊断目的的应用。
8.一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定试剂盒，包括：λ exo缓冲液，含有荧光基团及猝灭基团的报告探针序列、含有8-氧代鸟嘌呤的背景信号抑制探针序列，λ exo酶；背景信号抑制探针在8-氧代鸟嘌呤位点处被切割后，与报告探针在5’-荧光基团末端形成2-nt突出结构。
9.如权利要求8所述的一种基于背景信号抑制探针的8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定试剂盒在8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶测定中的应用；所述应用为非诊断目的的应用。
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