[发明专利]一种聚合物微球及其制备与应用

权利要求书

1.一种用于纯化IgG抗体的聚合物微球的制备方法，其特征在于所述聚合物微球是以聚乙烯醇和海藻酸钠为原料，加入水在80-100℃溶解后，降温至40℃后加入含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌菌液制成水相；再将液体石蜡和表面活性剂混合为油相，水相缓慢滴加到油相中，30-70℃搅拌形成乳液后，再加入饱和硼酸氯化钙水溶液，搅拌制备得到所述的聚合物微球；所述表面活性剂为span80；所述ZZ融合蛋白是将ZZ蛋白通过连接肽与锚定蛋白LppOmpA融合而成；

所述ZZ蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，连接肽氨基酸序列为GIPG；所述锚定蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.3；

ZZ融合蛋白编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.4所示；

所述含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌是将ZZ蛋白通过连接肽与锚定蛋白LppOmpA融合后的基因，用NcoI和HindIII限制性内切酶，转入载体pET28a，构建pET28a- LppOmpA-ZZ质粒，转化E.coli BL21(DE3)制备得到；

所述含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌菌液按如下方法制备：将含ZZ融合蛋白基因的重组大肠杆菌均匀涂布在含有50 μg/mL 卡那霉素的LB平板上，在30 ℃下放置培养过夜；从LB平板上挑取单菌落，以体积浓度1%的接种量接种于含50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基中，37 ℃，180 rpm摇床培养过夜至OD₆₀₀为0.62，获得所述的菌液；

所述海藻酸钠与聚乙烯醇质量比为1：6，所述水体积用量以海藻酸钠质量计为90-100mL/g；所述重组大肠杆菌菌液以湿菌体重量计，则湿菌体加入量与海藻酸钠质量比为1-5:100；所述液体石蜡与表面活性剂体积比为10-30:1.5；所述油相与水相体积比为10-30:20，所述油相与饱和硼酸氯化钙水溶液体积比为20-60:21.5。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于饱和硼酸氯化钙水溶液滴加速度40mL/5s。

3.一种根据权利要求1所述方法制备的用于纯化IgG抗体的聚合物微球。

4.一种权利要求3所述聚合物微球在制备抗体纯化填料中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述抗体包括IgG抗体。