[发明专利]脊髓性肌萎缩症检测方法

权利要求书

1.一种用于检测SMN1基因的相对拷贝数、SMN2基因的相对拷贝数及SMN1基因碱基突变的引物组和探针组在制备检测脊髓性肌萎缩症试剂中的应用，其特征在于，所述脊髓性肌萎缩症试剂包括：

第一扩增引物组，用以分别特异性地扩增SMN1基因第7外显子、SMN2基因第7外显子及内参基因；

第一检测探针组，用以分别特异性地检测SMN1基因、SMN2基因及内参基因分别经由所述第一扩增引物组扩增后的序列；其中，所述内参基因为β-actin内参基因；

第二扩增引物组，用以分别特异性地扩增SMN1基因的多个突变位点；其中，多个突变位点为c.-39A＞G、c.-7_9del、c.5C＞G、c.22dupA、c.40G＞T、c.43C＞T、c.56delT、c.84C＞T、c.326A＞G、c.400G＞A、c.683T＞A、c.689C＞T、c.744delC、c.811_814dup、c.830A＞G、c.835-5T＞G、c.835-1G及c.863G＞T；

第二检测探针组，用以分别特异性地检测SMN1基因经由所述第二扩增引物组扩增后的序列；

还包括上述脊髓性肌萎缩症试剂的使用方法：

(1)将包含样本基因组DNA、第一扩增引物组和第一检测探针组的第一反应管放入荧光定量PCR仪中，将包含样本基因组DNA、第二扩增引物组和第二检测探针组的第二反应管放入荧光定量PCR仪中；所述第一反应管和所述第二反应管在荧光定量PCR仪中进行PCR反应；

(2)荧光定量PCR仪检测所述第一反应管和所述第二反应管产生的荧光强度，通过测得的荧光强度值计算所述第一反应管中相应序列的相对拷贝数，及通过得到的熔解曲线分析所述第二反应管中的序列是否发生碱基突变。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一扩增引物组包括P1-SMN-EX7-F、P2-SMN-EX7-R、P1及P2；

其中，所述P1-SMN-EX7-F的核苷酸序列如SEQ ID No：1所示；所述P2-SMN-EX7-R的核苷酸序列如SEQ ID No：2所示；所述P1的核苷酸序列如SEQ ID No：3所示；所述P2的核苷酸序列如SEQ ID No：4所示。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述第一扩增引物组还包括P1-ACTB-F及P2-ACTB-R；

其中，所述P1-ACTB-F的核苷酸序列如SEQ ID No：5所示；所述P2-ACTB-R的核苷酸序列如SEQ ID No：6所示。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述第一检测探针组包括SMN1-7及SMN2-7；

其中，所述SMN1-7包括如SEQ ID No：7所示的核苷酸序列和分别连接在所述核苷酸序列5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团；所述SMN2-7包括如SEQ ID No：8所示的核苷酸序列和分别连接在所述核苷酸序列5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述SMN1-7的5’端连接VIC荧光基团，3’端连接MGB淬灭基团；所述SMN2-7的5’端连接FAM荧光基团，3’端连接MGB淬灭基团。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述第一检测探针组包括ACTB-P，所述ACTB-P包括如SEQ ID No：9所示的核苷酸序列和分别连接在所述核苷酸序列5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团。

7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述ACTB-P的5’端连接CY5荧光基团，3’端连接BHQ3淬灭基团。