[发明专利]用于血液样本荧光PCR的免提取试剂及其应用

权利要求书

1.一种用于血液样本荧光PCR的免提取试剂，具体包括：血液稀释液和PCR反应液，该免提取试剂与血液样品构成PCR反应体系，其中，

血液稀释液包括：醇类物质，碱性物质，Tris-HCl,Tween类非离子型表面活性剂；

PCR反应液包括：PCR缓冲液，热启动酶，UNG酶，Taq man SNP分型引物和探针，

其特征在于：

血液稀释液中醇类物质为PEG200，碱性物质为NaOH；且血液稀释液中各物质浓度分别为：PEG200含量为0.01wt％～0.02wt％，NaOH含量为45mM～55mM，Tris-HCl含量为5mM～50mM，Tween类非离子型表面活性剂含量为0.1wt％～1wt％。

2.根据权利要求1所述的免提取试剂，其特征在于：

血液稀释液中：Tween类非离子型表面活性剂为Tween20。

3.根据权利要求1所述的免提取试剂，其特征在于：

所述PCR反应液的pH值为9-10。

4.根据权利要求1-3任一项所述的免提取试剂，其特征在于：

PCR反应液中各物质浓度分别为：PCR缓冲液，热启动酶含量为(1～5)U/25μL，UNG酶含量为(0.05～0.5)U/25μL，各引物和探针含量分别为0.1～0.50M；

其中，PCR缓冲液中各物质在PCR反应液中的浓度分别为：5mM～50mM Tris-HCl、5mM～30mM KCl、10mM～50mM(NH₄)₂SO₄、2mM～5mM MgCl₂、0.1M～1M甜菜碱、0.1wt％～1wt％甘油、0.1mg/mL～0.5mg/mL BSA、0.1mM～0.5mM dNTPs，1wt％～5wt％甲酰胺、0.5wt％～3wt％DMSO。

5.根据权利要求4所述的免提取试剂，其特征在于：

PCR缓冲液中，热启动酶为ApexDirect DNA聚合酶，其在PCR反应液中的浓度为0.25U/25μL。

6.一种如权利要求1-5任一项所述免提取试剂的非疾病诊断与治疗目的的应用方法，具体包括如下步骤：

(1)配制血液稀释液；

(2)将血液样本与所述血液稀释液充分混合，形成稀释后血液样本；

(3)配制PCR反应液；

(4)将第(2)步中形成的稀释后血液样本与所述PCR反应液混合，并形成PCR反应体系，并采用荧光PCR仪进行扩增，并收集荧光。

7.根据技术方案6所述的应用方法，其特征在于，

步骤(2)中，通过混合过程将血液样本稀释至其原始浓度的15-25倍。

8.根据技术方案6-7任一项所述的应用方法，其特征在于，

步骤(2)中所述血液样本中含有抗凝剂，所述抗凝剂为EDTA、枸橼酸钠、肝素抗凝剂中的一种或多种。

9.根据技术方案6-8任一项所述的应用方法，其特征在于，

步骤(4)中荧光PCR仪扩增程序为：

第一步：37℃，5min，循环1次；

第二步：95℃，5min，循环1次；

第三步：95℃，15s；60℃，1min循环40次，收集荧光。