[发明专利]一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法，该方法采用高效液相‑蒸发光散射内标法进行测定，内标物选用木兰脂素。经方法学验证，该方法专属性、线性关系、仪器精密度、稳定性、重复性、准确度均表现良好，值得推广。

技术领域

本发明属于药物分析技术领域，涉及一种中药制剂中活性成分黄芪甲苷含量的测定方法。

背景技术

黄芪甲苷是中药材黄芪中生物活性最好的有效成分，其药效强度是常规黄芪多糖的2倍多，抗病毒作用更是黄芪多糖的30倍，有“超级黄芪多糖”之称。

本发明测定方法测定的中药组合物是发明人研制的一种复方中药，主要用于健脾益肾、化瘀解毒。其配方由黄芪、女贞子、人参等十一味中药组成。方中黄芪为君药，可补脾肺肾之气。

该中药组合物的质量标准收录于2020年版中国药典一部，标准中并未对黄芪甲苷的含量进行测定。

现有文献中公开了很多黄芪甲苷含量的测定方法，主要分为高效液相-蒸发光检测（HPLC-ELSD ）外标法和HPLC-ELSD内标法。例如，中国专利CN104280464A公开的一种中药组合物中黄芪甲苷的含量测定方法，该方法即为HPLC-ELSD 外标法。以此类方法测定黄芪甲苷含量时，由于蒸发光散射检测器（ELSD）的影响因素较多，系统稳定性较差，有时精密度不能满足分析要求。而且在同一天的样品检测中，采用不同时间段的对照品以外标2点对数法计算同一样品的含量，结果差异较大，达不到含量测定方法学的要求。

侯素云等人在“黄芪甲苷提取物中黄芪甲苷含量测定方法比较研究”的文章中公开了采用HPLC-ELSD内标法测定黄芪甲苷提取物中黄芪甲苷的含量，但该方法的精密度实验结果的相对标准差为2.11%，重复性实验结果的相对标准差为2.26%，稳定性实验结果的相对标准差为3.37%，加样回收率实验结果的相对标准差为3.90%，均较差，还有待改进提高。

单独进行黄芪中黄芪甲苷的含量，现有技术中无论是采用内标法还是外标法，效果都不尽如人意。

本发明中的药物组合物以黄芪为君药，控制好黄芪的含量是保证该药物组合物质量的重要手段。但是由于复方制剂中干扰因素过多，长期以来，申请人一直没有找到更好的方法来对复方制剂中黄芪的含量进行控制。

发明内容

本发明的目的是提供一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法，该方法采用高效液相-蒸发光散射内标法进行测定，克服了现有技术中采用外标法存在的技术缺陷。

为了实现上述目的，发明人提供了以下技术方案。

一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法，该中药组合物由下列重量份的原料药制成:黄芪250、女贞子200、人参65、灵芝65、莪术132、白术64、半枝莲128、绞股蓝256、茯苓65、鸡内金30、蛇莓128、白英128、茵陈128、徐长卿128、土鳖虫20、白花蛇舌草128。该组合物的有效组分是由以下步骤制成：

(1)、按照原料药重量比例称取中药材，净选；

(2)、人参、女贞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，滤液和人参、女贞子残渣备用;

(3)、莪术、白术、徐长卿，合并提取挥发油，提油时间6-12小时，挥发油另器收集，残渣及水溶液备用;

(4)、土鳖虫、鸡内金两味动物药，水洗，60℃烘干，与茯苓合并，粉碎成100目粉，灭菌后，得粉碎细粉，备用;

(5)、黄芪、灵芝、白花蛇舌草、半枝莲、绞股蓝、蛇莓、白英、茵陈，与步骤(2)中所得人参、女贞子的醇提后残渣，及步骤(3)中所得莪术、白术、徐长卿提油后残渣合并，加9倍量水，加热煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，加入步骤(2)中所得人参、女贞子醇提液和步骤（3）所得水溶液，浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏，干燥，粉碎，得干膏粉，备用；