[发明专利]一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法

权利要求书

1.一种中药组合物中黄芪甲苷含量的测定方法，其特征在于，采用高效液相-蒸发光散射内标法进行测定，内标物为木兰脂素。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，操作步骤包括：

a. 内标储备液的制备：取木兰脂素对照品适量，置于容量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.3mg木兰脂素的甲醇溶液，得木兰脂素内标储备液，备用；

b. 黄芪甲苷储备液的制备：取黄芪甲苷对照品适量，置于容量瓶中，加甲醇制成每1ml含0.2mg黄芪甲苷的甲醇溶液，得黄芪甲苷储备液，备用；

c. 混合对照品溶液的制备：分别精密量取黄芪甲苷储备液和木兰脂素内标储备液适量，置于同一容量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含40μg黄芪甲苷和60μg木兰脂素的第一混合对照品溶液；

再分别精密量取黄芪甲苷储备液和木兰脂素内标储备液适量，置于同一容量瓶中，加70%甲醇制成每1ml含120μg黄芪甲苷和60μg木兰脂素的第二混合对照品溶液；

d. 供试品溶液的制备：取中药组合物2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，第一次称定重量，随后进行超声处理，放至室温，第二次称定重量，计算第一次称定和第二次称定的重量差，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25ml，水浴蒸干，残渣加水25ml溶解转移至分液漏斗中，加入用水饱和的正丁醇萃取3次，每次25ml，合并正丁醇液，先用1%的NaOH溶液洗涤3次，每次20ml，再使用正丁醇饱和的水洗涤3次，每次25ml，最后将合并后的正丁醇液蒸干，残渣中精密加入木兰脂素内标储备液1ml，以及适量的70%甲醇，随后转移至5ml的容量瓶中，用70%的甲醇定容，摇匀，滤过，得供试品溶液，备用；

e. 色谱条件：色谱柱：Welch Ultimate XB-C18 column；流动相：以乙腈为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测器采用蒸发光散射检测器；

f. 检测： 分别精密吸取第一混合对照品溶液20µl、第二混合对照品溶液20µl、供试品溶液20μl，注入高效液相色谱仪中测定峰面积，绘制标准曲线，计算黄芪甲苷的含量即可。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤f中所述标准曲线以ln黄芪甲苷峰面积/ln木兰脂素峰面积为纵坐标，以ln黄芪甲苷浓度/ln木兰脂素浓度为横坐标。

4.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤d中所述超声处理的时间为30分钟，功率为250W，频率为40 kHz。

5.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤e中所述色谱柱的柱温为30℃。

6.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤e中所述梯度洗脱过程中流动相的比例如下表所示：

。

7.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤e中所述梯度洗脱的流速为1.0ml/min。

8.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于，步骤e中所述蒸发光散射检测器工作时漂移管温度为70℃，气体流速为25psi。

9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述中药组合物由下列重量份的原料药制成:黄芪250、女贞子200、人参65、灵芝65、莪术132、白术64、半枝莲128、绞股蓝256、茯苓65、鸡内金30、蛇莓128、白英128、茵陈128、徐长卿128、土鳖虫20、白花蛇舌草128。

10.根据权利要求9所述的测定方法，其特征在于，该组合物的有效组分是由以下步骤制成：

(1)、按照原料药重量比例称取中药材，净选；

(2)、人参、女贞子，加8倍量70%乙醇回流提取2次，第一次3小时，第二次2小时，合并提取液，回收乙醇至无醇味，滤液和人参、女贞子残渣备用;

(3)、莪术、白术、徐长卿，合并提取挥发油，提油时间6-12小时，挥发油另器收集，残渣及水溶液备用;

(4)、土鳖虫、鸡内金两味动物药，水洗，60℃烘干，与茯苓合并，粉碎成100目粉，灭菌后，得粉碎细粉，备用;

(5)、黄芪、灵芝、白花蛇舌草、半枝莲、绞股蓝、蛇莓、白英、茵陈，与步骤(2)中所得人参、女贞子的醇提后残渣，及步骤(3)中所得莪术、白术、徐长卿提油后残渣合并，加9倍量水，加热煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，加入步骤(2)中所得人参、女贞子醇提液和步骤（3）所得水溶液，浓缩成相对密度1.20-1.25的清膏，干燥，粉碎，得干膏粉，备用；

将步骤(5)所得干膏粉，步骤(3)中所得挥发油与步骤(4)中所得粉碎细粉混合，即得到本药物组合物的有效组分。