[发明专利]一种基于ISBP标记鉴定甘薯品种的引物组、鉴定方法及应用

权利要求书

1.一种ISBP引物组，其特征在于，包括IbISBP14,IbISBP18,IbISBP19,IbISBP31,IbISBP57,IbISBP60,IbISBP67,IbISBP69,IbISBP72和IbISBP79引物对；

所述引物对IbISBP14为SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP18为SEQ ID NO：3所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP19为SEQ ID NO：5所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：6所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP31为SEQ ID NO：7所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：8所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP57为SEQ ID NO：9所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：10所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP60为SEQ ID NO：11所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：12所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP67为SEQ ID NO：13所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：14所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP69为SEQ ID NO：15所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：16所示的核苷酸序列；

所述引物对IbISBP72为SEQ ID NO：17所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：18所示的核苷酸序列；

和所述引物对IbISBP79为SEQ ID NO：19所示的核苷酸序列和SEQ ID NO：20所示的核苷酸序列。

2.一种权利要求1所述ISBP引物组在鉴定或辅助鉴定甘薯品种中的应用。

3.一种PCR试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的10对PCR引物对。

4.根据权利要求 3所述的PCR试剂盒，其特征在于，各对引物对中各条引物的摩尔比为1:1，每个PCR试剂中各对引物对中各条引物的浓度为10μmol/L。

5.一种应用权利要求1所述ISBP引物组鉴定甘薯品种的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)分别使用IbISBP14,IbISBP18,IbISBP19,IbISBP31,IbISBP57,IbISBP60,IbISBP67, IbISBP69,IbISBP72和IbISBP79引物对对不同已知甘薯种质资源的DNA进行ISBP-PCR引物扩增得到不同甘薯种质资源的10对ISBP引物扩增产物；

(2)电泳检测步骤(1)中得到的待检测甘薯的10对ISBP-PCR引物扩增产物，根据电泳结果确定有效位点，在相同迁移位置上，扩增带型以“1”、“0”分别表示条带的有和无，构建每个甘薯种质资源的10对ISBP-PCR引物扩增产物的“1”、“0”数字指纹图谱，每个甘薯种质资源包含10个数字指纹图谱，所有甘薯种质资源的数字指纹图谱构成甘薯种质资源数字指纹图谱库；

(3)将待鉴定甘薯样品依照步骤(1)和步骤(2)进行ISBP-PCR引物扩增并电泳得到待鉴定甘薯种质资源的数字指纹图谱；将待鉴定甘薯种质资源的数字指纹图谱与甘薯种质资源数字指纹图谱库进行比对：

若待鉴定甘薯种质资源的数字指纹图谱与图谱库中某一种质资源甘薯数字指纹图谱中至少有2个带型不同，则待鉴定甘薯样品与该种质资源甘薯为或候选为不同品种；若甘薯样品中某两个甘薯种质资源的数字指纹图谱中最多有1个带型不同，则该两个品种为或候选为相同品种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，10对ISBP-PCR引物扩增产物，根据电泳结果确定有效位点大小近似为：

IbISBP14：710，680，450，310，280，260，255，250，205，195，190和180bp；

IbISBP18：897，800，516，480，370，325，300，287，210和205bp；

IbISBP19：358，290，220，196，193，190，120和110bp；

IbISBP31：529，500，494，426，400，298，215，200，196和190bp；

IbISBP57：300，229，194，150，144和90bp；

IbISBP60：790，597，530，439，271和259bp；

IbISBP67：600，586，512，504，482，407，315，300，289，284，216，204，69，58，49和44bp；

IbISBP69：529，509，489，393，319，309，278，249，206，192，159，135和122bp；

IbISBP72：373，292，276，269，229，179，171，143，138，130和113bp；

IbISBP79：999，900，789，635，320，300和186bp。