[发明专利]一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺

说明书

本发明公开了一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺，S1、样品菌液的制备：将乳酸菌来源样品剪碎、研磨，转入装有9mL无菌水或生理盐水的离心管中，涡旋或摇床震荡混匀10‑30min，即稀释10^‑1的样品液，继续将样品稀释至10^‑3,10^‑4和10^‑5中；S2、乳酸菌菌落的培养：分别吸取步骤S1中10^‑3,10^‑4和10^‑5样品液0.2mL，涂布在MRS琼脂培养基上按每个梯度3个平板进行操作，在温度为37℃下培养24‑48h，得到所需的乳酸菌菌落。本发明将菌液涂布在MRS琼脂培养基上，MRS琼脂培养基上含有特定含量的葡萄糖、蛋白胨和酵母膏等复配的冻干保护剂，此外，结合冻干后的真空‑充氮研磨粉碎技术，能够有效避免冻干粉在粉碎过程中吸收环境的水分。

技术领域

本发明涉及乳酸菌冻干粉技术领域，具体为一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺。

背景技术

乳酸菌是一类可发酵碳水化合物，主要生成乳酸的细菌总称，随着乳酸菌对人体健康有益作用机理研究的不断深入以及人们保健意识的增强，乳酸菌得到越来越多的关注和研究开发，目前已被广泛应用于营养保健、食品、医药、饲料添加剂等行业中。

目前乳酸菌多以冻干粉的形式供应市场，乳酸菌的菌种有双歧杆菌、德式乳杆菌等，在制备的过程中，乳酸菌直接进行冷冻干燥时很容易衰退失活，活菌稳定性低，使得微生物细胞容易造成损伤，降低了细胞的生物活性，从而降低了活菌率，从而降低了冻干粉在食品、医药以及添加剂等行业中的应用，为此，我们提出了一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺来解决上述问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种乳酸菌冻分离和干粉制作工艺，包括以下步骤：

S1、样品菌液的制备：将乳酸菌来源样品剪碎、研磨，转入装有9mL无菌水或生理盐水的离心管中，涡旋或摇床震荡混匀10-30min，即稀释10^-1的样品液，继续将样品稀释至10^-3,10^-4和10^-5中；

S2、乳酸菌菌落的培养：分别吸取步骤S1中10^-3,10^-4和10^-5样品液0.2mL，涂布在MRS琼脂培养基上按每个梯度3个平板进行操作，在温度为37℃下培养24-48h，得到所需的乳酸菌菌落；

S3、染色和划线操作：将步骤S2中培养的乳酸菌菌落中挑取有透明圈的菌落，进行革兰氏染色，将G+在MRS琼脂板上划线，37℃培养24h，重复1-2次，直至得到纯菌落，实现；

S4、菌落的第一次活化：将步骤S3中制备的乳酸菌放入实验室冰箱中进行保藏操作，将乳酸菌用100ml灭菌的MRS液体培养基进行第一次活化，活化温度37℃，24h后平板检测纯度和活菌数；

S5、菌落的第二次活化：将步骤S4中100ml菌液全部转入至400ml灭菌MRS液体培养基进行第二次活化，24h后平板检测纯度和活菌数，检测达标后转至40L发酵罐中进行扩大培养48h；

S6、活菌数的测定：将步骤S5中活化、扩培后的菌种，接入MRS液体培养基培养，待测活菌数时，取0.5mL发酵液加入至4.5mL灭菌的生理盐水中，依次做10倍系列稀释，选取10^-8,10^-9和10^-10三个稀释倍数，吸取0.2mL稀释液注入无菌培养皿中，倾注法加入15mL左右的计数培养基混匀，每个稀释度做三个平行培养皿；

S7、恒温培养箱培养：将步骤S6培养基凝固后，倒置放入37℃恒温培养箱中，培养48h，选取菌落数在30-300之间的培养皿计菌落数；