[发明专利]一种基于ddPCR定量检测ALK、RET和ROS1融合基因的试剂盒在审

申请号：	202110309647.2	申请日：	2021-03-23
公开（公告）号：	CN112852967A	公开（公告）日：	2021-05-28
发明（设计）人：	赵艳红;王强	申请（专利权）人：	上海真固生物科技有限公司
主分类号：	C12Q1/6886	分类号：	C12Q1/6886;C12Q1/6851
代理公司：	上海邦德专利代理事务所(普通合伙) 31312	代理人：	余昌昊
地址：	200233 上海市***	国省代码：	上海;31
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摘要：
搜索关键词：	一种基于 ddpcr 定量检测 alk ret ros1 融合基因试剂盒
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【权利要求书】：

1.一种基于ddPCR定量检测ALK、RET和ROS1融合基因的试剂盒，其特征在于，包括阴性对照品，阳性对照品，PCR反应液Ⅰ，PCR反应液Ⅱ；所述的PCR反应液Ⅱ包括EML4-ALK融合基因的引物和荧光探针、CCDC6-RET融合基因的引物和荧光探针、CD74-ROS1融合基因的引物和荧光探针以及内控基因TBP的引物和荧光探针。

2.如权力要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照品为含有插入EML4-ALK、CCDC6-RET、CD74-ROS1和TBP的特异序列的T-Vector载体质粒，所述的插入序列分别如下：

EML4-ALK融合基因插入序列：

CTTACTGGAGACTCAGGTGGAGTCATGCTTATATGGAGCAAAACTACTGTAGAGCCCACACCTGGGAAAGGACCTAAAGTGTACCGCCGGAAGCACCAGGAGCTGCAAGCCATGCAGATGGAGCTGCAGAGCCCTGAGTACAAGCTGAGCAAGCTCCGCACCTCGACCATCATGACCGACTACAACCCCAACTACTGCTT(200bp)

CCDC6-RET融合基因插入序列：

GAGACCTACAAACTGAAGTGCAAGGCACTGCAGGAGGAGAACCGCGACCTGCGCAAAGCCAGCGTGACCATCGAGGATCCAAAGTGGGAATTCCCTCGGAAGAACTTGGTTCTTGGAAAAACTCTAGGAGAAGGCGAATTTGGAAAAGTGGTCAAGGCAACGGCCTTCCATCTGAAAGGCAGAGCAGGGTACACCACGGTGG(202bp)

CD74-ROS1融合基因插入序列：

TGGATGCACCATTGGCTCCTGTTTGAAATGAGCAGGCACTCCTTGGAGCAAAAGCCCACTGACGCTCCACCGAAAGATGATTTTTGGATACCAGAAACAAGTTTCATACTTACTATTATAGTTGGAATATTTCTGGTTGTTACAATCCCACTGACCTTTGTCTGGCATAGAAGATTAAAGAATCAAAAAAGTGCCAAGGAAGGG(204bp)

内控基因TBP插入序列：

ACAGACTCTCACAACTGCACCCTTGCCGGGCACCACTCCACTGTATCCCTCCCCCATGACTCCCATGACCCCCATCACTCCTGCCACGCCAGCTTCGGAGAGTTCTGGGATTGTACCGCAGCTGCAAAATATTGTATCCACAGTGAATCTTGGTTGTAAACTTGACCTAAAGACCATTGCACTTCGTGCCCG(192bp)。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的EML4-ALK融合基因的引物探针序列如下：

扩增检测EML4-ALK的正向引物：CAGGTGGAGTCATGCTTATATGG

扩增检测EML4-ALK的反向引物：CGGAGCTTGCTCAGCTTGTA

扩增检测EML4-ALK的探针：CCGCCGGAAGCACCAGGAGC。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的CCDC6-RET融合基因的引物探针序列如下：

扩增检测CCDC6-RET的正向引物：GCAGGAGGAGAACCGCGA

扩增检测CCDC6-RET的反向引物：TACCCTGCTCTGCCTTTCAGA

扩增检测CCDC6-RET的探针：AGTGGGAATTCCCTCGGAAGAACTTG。

5.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述的CD74-ROS1融合基因的引物探针序列如下：

扩增检测CD74-ROS1的正向引物：GCAAAAGCCCACTGACGCT

扩增检测CD74-ROS1的反向引物：TCTTCTATGCCAGACAAAGGTCAG

扩增检测CD74-ROS1的探针：CCAGAAACAAGTTTCATACTTA。