[发明专利]一种植物疫霉菌荧光素酶标记菌株的制备方法及其在植物疫病防控中的应用

权利要求书

1.荧光素酶标记的病原菌作为报告系统在筛选抗病资源或农作物抗性中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，使用荧光素酶标记的病原菌的游动孢子、菌丝、卵孢子或菌饼接种植物，侵染后添加荧光素酶底物，统计病斑长度或面积；以病斑长度或面积衡量农作物抗性或不同类型潜在抗病资源对病原菌的抑制或促进作用。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的抗病资源为具有生物防治潜力的抗病基因或微生物菌株、化学农药或生物农药。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的病原菌为植物病原菌。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的植物病原菌为疫霉菌。

6.一种以荧光素酶标记的病原菌为报告系统筛选抗病资源或农作物抗性的方法，其特征在于，使用荧光素酶标记的病原菌的游动孢子、菌丝、卵孢子或菌饼接种植物，侵染后添加荧光素酶底物，统计病斑长度或面积；以病斑长度或面积衡量农作物抗性或不同类型潜在抗病资源对病原菌的抑制或促进作用。

7.一种荧光素酶标记的病原菌，其特征在于，该病原菌是将用于过表达荧光素酶的转化载体转入病原菌并进行筛选获得荧光素酶标记的病原菌菌株；所述的转化载体用于病原菌瞬时转化或稳定转化，包含编码荧光素酶的基因序列或密码子优化得到的荧光素酶的基因序列。

8.根据权利要求1所述的荧光素酶标记的病原菌，其特征在于，所述转化载体的制备方法为：以如SEQ ID NO.1所示的荧光素酶基因为模板，利用如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物扩增出目的片段；利用片段重组的方法，将目的片段连接至疫霉表达载体中，筛选阳性克隆作为用于过表达荧光素酶的转化载体。

9.根据权利要求7或8所述的荧光素酶标记的病原菌，其特征在于，所述的病原菌为大豆疫霉或辣椒疫霉；所述荧光素酶标记的病原菌的菌株为菌株PsLuc或菌株PcLuc，所述的菌株PsLuc分类命名为大豆疫霉(Phytophthora sojae)，于2020年11月11日保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为：CGMCC No.21049，所述的菌株PcLuc分类命名为辣椒疫霉(Phytophthora capsici)，于2020年11月11日保藏于中国普通微生物保藏管理中心，保藏编号为：CGMCC No.21048。

10.一种用于过表达荧光素酶的转化载体，其特征在于，该转化载体用于病原菌瞬时转化或稳定转化，包含编码荧光素酶的基因序列或密码子优化得到的荧光素酶的基因序列；优选的，该转化载体的制备方法为：以如SEQ ID NO.1所示的荧光素酶基因为模板，利用如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的引物扩增出目的片段；利用片段重组的方法，将目的片段连接至疫霉表达载体中，筛选阳性克隆作为用于过表达荧光素酶的转化载体。