[发明专利]大规模基因重排的酵母菌及其构建方法

权利要求书

1.大规模基因重排的酵母菌的构建方法，其特征在于，包括：

在酿酒酵母野生型染色体II、III、V、VI、IX或X的着丝粒附近同源重组带vox位点的片段，获得待敲除染色体的酵母菌株；

将两个交配型相反的单倍体酵母菌株融合，构建二倍体酵母菌株；

向二倍体酵母菌株中转化Vika质粒，采用Vika/vox技术删除野生型染色体，然后减数分裂获得单倍体菌株；所述野生型染色体的删除的顺序为II和IX、V、X、VI、III；

所述两个交配型相反的单倍体酵母菌株，其中一个含有合成型染色体synV和synX，另一个含有合成型染色体synII、synIII、synVI和synIXR；所述带vox位点的片段的同源重组包括：合成带筛选抗性基因、两个vox位点和野生型染色体着丝粒两端同源序列的片段，经Gibson组装获得靶向染色体的片段，连入pUC19 质粒，经线性化后转化入酿酒酵母菌株，与待敲除染色体发生同源重组。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，

所述筛选抗性基因为KanMX基因或hphNT1基因，

所述待敲除染色体着丝粒两端同源序列的长度为1000bp。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述野生型染色体的删除包括，将带有筛选抗性基因和vox位点的片段导入待敲除染色体的菌株，缺陷型筛选获得染色体删除成功的菌株。

4.大规模基因重排的酵母菌，其由权利要求1~3任一项所述的方法构建获得，其染色体中野生型II、III、V、VI、IX和X染色体被替换为合成型染色体synII、synIII、synV、synVI、synIXR和synX。

5.一种酵母菌基因重排的方法，其特征在于，诱导权利要求4所述的酵母菌，或诱导权利要求1~3任一项所述方法构建获得的酵母菌，使其基因发生重排。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述诱导包括：以His营养缺陷型培养基培养。