[发明专利]人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法

说明书

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法。本发明提供的人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的制备方法，以Boc‑Ser(Fmoc‑Gly)‑OH为原料之一，按照人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42的氨基酸序列制备26‑氧酰异Aβ1‑42，经酰基迁移得到人血清淀粉样蛋白Aβ1‑42；该方法以侧链活性基团全保护的氨基酸为原料，降低了合成过程中发生副反应的几率；并且各步骤中，控制合成参数，从而提高了产物的收率，减少了副反应的发生。

技术领域

本发明涉及多肽合成技术领域，尤其涉及人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法。

背景技术

“阿尔茨海默症”(Alzheimer disease)，简称AD，是与老龄化有关的、以大脑神经细胞广泛死亡为特点的疾病，其结果是大脑神经细胞逐渐丧失，最终造成记忆力、判断决策力、方位感、注意力和语言能力的损伤。近年来阿茨海默症发病率呈明显上升趋势，我国的发病率为0.71％，约有1000万阿尔茨海默症患者。预计到2050年，我国阿尔茨海默症患者人数将达2700万。由于阿尔茨海默症是与年龄密切相关的疾病，在65岁的人群中约有10％的人患病，而在85岁人群中则约有50％的人患病。

阿尔茨海默症的病理特征主要包括大脑皮质和海马区域的细胞外出现以β-淀粉样蛋白(beta-amyloid,Aβ)为核心的老年斑、细胞内神经原纤维缠结等病变。Aβ是由淀粉样前体蛋白经β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而产生的含有39～43个基酸的多肽，Aβ的大量沉积，是导致AD病人脑内老年斑周边神经元变性和死亡的主要原因。Aβ在脑内有多种存在形式，如：低分子量Aβ单体、Aβ寡聚体、不溶性Aβ纤维体等。Aβ单体是可溶性的低分子物质，但是当胞内环境改变时会诱发Aβ单体快速聚集，形成二聚体、三聚体或可溶性的Aβ寡聚体，Aβ寡聚体的稳定性较差，易向Aβ纤维体转化。Aβ的种类分为Aβ1-39、Aβ1-40、Aβ1-41、Aβ1-42和Aβ1-43，其中Aβ1-42的毒性最大，具有强水性、易聚集和较强的神经毒性作用，是AD的核心致病物质。因此，研究Aβ1-42是当前的热点。

Aβ1-42的氨基酸序列自N端至C端为：DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA。

国内外合成Aβ1-42的寡聚体均不稳定，淀粉样肽在体外容易随机形成各种高分子量或低分子量的混合产物，这种组分不均一的混合物直接影响到实验结果的准确性和可靠性。近年来，许多研究者用多种方法制备Aβ1-42寡聚体，但收率都较低、中间产物不稳定、成分复杂。Aβ1-42由于其高度疏水性以及容易形成聚集，常规固相合成的方式很难制备出Aβ1-42。进一步开发固相合成多肽Aβ1-42的方法，可为AD科研实验打下良好的基础，也为AD的发病机制、病理过程、寻找和筛选有效药物提供有效依据。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法，该方法以侧链活性基团全保护的氨基酸为原料，降低了合成过程中发生副反应的几率；并且各步骤中，控制合成参数，选择合理的反应试剂，从而提高了产物的收率，减少了副反应的发生。

本发明提供的人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的制备方法，包括：

以Boc-Ser(Fmoc-Gly)-OH为原料之一，按照人血清淀粉样蛋白Aβ1-42的氨基酸序列制备26-氧酰异Aβ1-42，经酰基迁移得到人血清淀粉样蛋白Aβ1-42；

偶联1～25位中任意氨基酸或多肽后，脱除Fmoc的步骤中采用8vol％～12vol％哌啶/DMF溶液。