[发明专利]山地虎耳草中新的二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂及其分离制备工艺和应用

权利要求书

1.山地虎耳草中二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，具体包括如下步骤：

步骤1，提取：将山地虎耳草全草阴干，粗碎后按料液比1g：5～100mL的甲醇提取，在室温下提取2～4次，每次2～4h，过滤、合并滤液，即滤液A，该滤液A经减压干燥得山地虎耳草提取物，按聚酰胺的量：山地虎耳草提取物的量＝3:1拌样并减压干燥，即得山地虎耳草提取物拌样样品；

步骤2，在线自由基抑制剂组分筛选：在1g山地虎耳草拌样样品中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草甲醇样品溶液，即滤液B，取1mL滤液B，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草粗样中自由基抑制剂组分，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18250×4.6mm，5μm反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤3，微孔树脂柱中压色谱粗分：山地虎耳草提取物拌样样品，该样品经装有微孔树脂的中压色谱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中第4个主要的色谱峰馏分，该馏分经减压干燥即得目标组分Fr4，其中，所述微孔树脂柱的中压色谱分离工作参数为：色谱柱柱长460mm、直径49mm，微孔树脂柱固定相为CHP20P，流动相A为水，B为甲醇，色谱条件为0～90min，0～100％B，进样量为35.4g，流速为50mL/min；

步骤4，在线自由基抑制剂筛选：在山地虎耳草目标组分中加入体积浓度为70～90％的甲醇进行溶解，配制样品浓度为50.0～100.0mg/mL，经0.45μm微孔滤膜过滤，得到山地虎耳草含有目标组分的溶液，即滤液C，取1mL滤液C，利用在线HPLC-DPPH色谱联用系统，筛选山地虎耳草目标组分中自由基抑制剂，其中，所述在线HPLC-DPPH色谱联用系统，第一台高效液相色谱仪采用耐纯水C18250×4.6mm，5μm反相色谱柱，检测波长为210nm；第二台高效液相色谱仪进甲醇溶解的DPPH溶液，检测波长为517nm；

步骤5，反相制备柱制备：所述滤液C经反相制备柱分离，经检测波长为210nm的紫外检测器检测，收集制备色谱图中对应的色谱峰馏分Fr4-1，色谱峰馏分Fr4-1经减压干燥即得纯度大于95％的二芳基壬烷类自由基抑制剂Fr4-1，并命名为SaximonsinA；其中，所述反相制备柱制备的工作参数为：制备柱柱长250mm、直径20mm，反相色谱柱固定相为5μm耐纯水C18，流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，14％B洗脱，进样体积为4mL，流速为19mL/min；所述二芳基壬烷类自由基抑制剂呈棕色油状，其分子式为C₂₂H₂₆O₆，其化学结构式为：

2.根据权利要求1所述的山地虎耳草中二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤1、步骤3和步骤5中，减压干燥的条件均为：真空度50～250mbar，温度40～60℃。

3.根据权利要求1所述的山地虎耳草中二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤2中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，5～50％B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为25μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。

4.根据权利要求1所述的山地虎耳草中二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，所述步骤4中，第一台高效液相色谱仪采用的流动相A为水溶液，流动相B为乙腈溶液，按照0～60min，14％B，流动相流速为1.0mL/min；第二台高效液相色谱仪所使用的DPPH溶液浓度为25μg/mL，流动相流速为0.5mL/min；反应环长度为15m。

5.根据权利要求1所述的山地虎耳草中二芳基壬烷类Ⅰ自由基抑制剂的分离制备工艺，其特征在于，步骤2、步骤4及步骤5所述的耐纯水C18反相色谱柱为耐纯水ReprosilC18反相色谱柱、耐纯水Megres C18反相色谱柱及耐纯水Kromasil 100-5-C18 w反相色谱柱中的任意一种。