[发明专利]一种牛源性成分的LAMP检测方法

权利要求书

1.一种牛源性成分的LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

a)设计合成引物；所述引物由上游内部引物FIP、下游内部引物BIP、上游外部引物F3和下游外部引物B3组成，所述引物的碱基序列如SEQ ID No：1～4；

b)制备18种不同的动物和植物，即猪、绵羊、山羊、驴、马、骡子、猫、鼠、鸡、鸭、鹅、水稻、拟南芥、玉米、大豆、小麦、大麦和棉籽的DNA稀释液；

c)配制LAMP反应体系并设定反应条件；

d)进行LAMP方法特异性检测；

e)进行LAMP方法灵敏度检测。

2.根据权利要求1所述的牛源性成分的LAMP检测方法，其特征在于，步骤b)中，所述DNA稀释液的浓度为20ng/μL。

3.根据权利要求1所述的牛源性成分的LAMP检测方法，其特征在于，步骤c)中，所述LAMP反应体系的配置方法为：将2μL的DNA稀释液加入到23μL反应体系中；

所述23μL的反应体系包括以下体积含量的各组分：

LAMP反应条件为：65℃扩增反应1h，1个循环；80℃使酶失活5min、4℃降温5min，1个循环。

4.根据权利要求1所述的牛源性成分LAMP特异性检测方法，其特征在于，步骤d)中，阳性样品为4种不同品种的牛，分别是北美野牛、奶牛、牦牛和水牛，阴性样品为18种不同的动物和植物，分别是猪、绵羊、山羊、驴、马、骡子、猫、鼠、鸡、鸭、鹅、水稻、拟南芥、玉米、大豆、小麦、大麦和棉籽，并用ddH₂O设置阴性对照。

5.根据权利要求1所述的牛源性成分LAMP灵敏度检测方法，其特征在于，步骤e)中，先将牦牛DNA模板稀释成7个浓度梯度(20ng/μL、10ng/μL、2ng/μL、1ng/μL、0.2ng/μL、0.02ng/μL、0.002ng/μL)，再用LAMP方法进行灵敏度测试。

6.根据权利要求1所述的牛源性成分LAMP特异性检测方法，其特征在于，对步骤d)中的扩增产物首先进行2％琼脂糖凝胶电泳，200V，25min。2％琼脂糖凝胶电泳出梯状条带的为牛属的样品，无条带的为其他样品或空白对照。

7.根据权利要求1所述的牛源性成分LAMP灵敏度检测方法，其特征在于，对步骤e)中的扩增产物进行2％琼脂糖凝胶电泳，200V，25min。出现梯状条带对应的最低拷贝数就是该检测方法的检测下限(limit of detection，LOD)。