[发明专利]一种核酸引物保存液的制备方法

说明书

本发明公开了一种核酸引物保存液的制备方法，其特征在于：保存液以1000mL计，包括如下组分：硫柳汞2‑3份、1MTris‑HCL0.2‑0.4份；0.5M金属螯合剂0.1‑0.3份；酸度调节剂、缓冲液；余量为纯水；将三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠与纯水充分混合直至完全溶解，形成第一混合物；向第一步中得到的第一混合物中添加酸碱调节剂，并混合，调节pH值为8.0，再加入硫柳汞，最后加入纯水定容至100ml，获得核酸保存液；本发明的核酸保存液能够提高核酸在溶液中稳定性，延缓核酸降解，从而能够增长核酸在液体状态的保存周期。同时能够有效避免反复冻溶，减少实验操作步骤，缩短整个实验进程。

技术领域

本发明属于核酸保存技术领域，涉及一种保存液的制备方法，具体为一种核酸引物保存液的制备方法。

背景技术

核酸是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物，广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内，生物体内的核酸常与蛋白质结合形成核蛋白。根据化学组成不同，核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核酸(简称DNA)。核酸的性能不稳定，容易变性，因此，在研究过程中，通常将核酸置于超低温(-70℃)下进行长期保存，然而，该保存方式易对核酸的结构造成影响，且研究过程中需要进行反复冻溶。

目前溶解核酸主要是以TE溶液为主，使用超纯水作为溶剂。TE溶剂相对超纯水来说保存周期有一定延长，室温条件下一般在1个月左右就会出现明显降解。通过分析型高效液相色谱进行纯度验证实验，三组不同样品分别分装四管，样品1编号为1-A；1-B；1-C；1-D；样品2编号为2-A,2-B,2-C；2-D；样品3编号3-A,3-B,3-C；3-D。第一周验证编号A的三组样品，第二周验证编号B的三组样品，第三周验证编号C的三组样品，第四周验证编号D的三组样品。纯度数据如图表所示。(如图2所示)

现有技术中采用了硫柳汞左右稳定剂，最终获得的保存液可在室温下保存核酸，相同条件下保存周期延长至1年。

发明内容

本发明的目的就在于为了解决核酸的性能不稳定，容易变性，因此，在研究过程中，通常将核酸置于超低温(-70℃)下进行长期保存，然而，该保存方式易对核酸的结构造成影响，且研究过程中需要进行反复冻溶；目前溶解核酸主要是以TE溶液为主，使用超纯水作为溶剂。TE溶剂相对超纯水来说保存周期有一定延长，室温条件下一般在1个月左右就会出现明显降解的问题，而提出一种核酸引物保存液的制备方法。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种核酸引物保存液的制备方法，保存液以1000mL计，包括如下组分：硫柳汞2-3份、1M Tris-HCL0.2-0.4份；0.5M金属螯合剂0.1-0.3份；酸度调节剂、缓冲液；余量为纯水；

该保存液的制备方法包括以下步骤：

第一步：将三羟甲基氨基甲烷、乙二胺四乙酸二钠与纯水充分混合直至完全溶解，形成第一混合物；

第二步：向第一步中得到的第一混合物中添加酸碱调节剂，并混合，调节pH值为8.0，再加入硫柳汞，最后加入纯水定容至100ml，获得核酸保存液。

优选的，所述酸度调节剂包括冰乙酸、聚丙烯酸中的至少一种。

优选的，金属螯合剂为乙二胺四乙酸二钠，与二价金属离子结合；二价金属离子为Mg²⁺、Ca²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺。

优选的，对保存在保存液中的核酸进行检测：通过分析型高效液相色谱进行纯度验证实验，包括以下步骤：