[发明专利]用于免疫检测的组合物、试剂盒、检测方法及应用

说明书

本申请属于生物学免疫分析技术领域，具体公开了一种用于免疫检测的组合物，包括第一探针和第二探针，所述第一探针包括第一核苷酸序列连接于第一蛋白；所述第二探针包括第二核苷酸序列连接于第二蛋白；所述第一蛋白和第二蛋白能够同时识别并结合于目标分子，所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列能够通过DNA连接酶连接。本申请至少具有以下有益效果之一：本申请提供的组合物用于免疫检测时，特异性高，灵敏度高，将第一核苷酸序列和/或第二核苷酸序列标记上不同的样本标签，可以实现高通量检测，具有广泛的应用价值。

技术领域

本申请属于生物学免疫分析技术领域，更具体地说，它涉及一种用于免疫检测的组合物、试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

免疫诊断是利用抗原抗体之间的特异性免疫反应来测定免疫状态、检测各种疾病的诊断方法。目前的免疫检测技术主要包括放射免疫技术，免疫胶体金技术、酶联免疫分析技术、化学发光免疫分析技术等。放射免疫虽然灵敏度高，但用品昂贵，且存在放射性污染；胶体金免疫反应速度快，操作便捷，但灵敏度和特异性差；酶联免疫法虽然灵敏度较高，但其结果好坏取决于包被基质，固相载体的包被难以达到各批次之间一致，因此重复性较差；化学发光免疫灵敏度高、自动化程度高，但是发光强度低、不易测量，仪器设备较昂贵。

发明内容

对于感染性疾病的诊断，最理想的是针对病原体的诊断，但由于某些病原体生长所需条件高，生长时间长、检出的阳性率低，给临床诊断带来一定困难。发明人发现检测机体免疫产生的特异性抗体在一定程度上可弥补以上的不足，因此迫切需要开发出特异性高、灵敏度高、通量高的抗体检测技术应用于感染性疾病的诊断。

基于此，本申请提供了一种用于免疫检测的组合物，利用该组合物检测时，第一蛋白和第二蛋白能够特异性识别并结合于目标分子形成复合物，此时第一核苷酸序列和第二核苷酸序列在空间位置上相互邻近，通过连接反应形成一段可扩增的DNA序列，以实时PCR进行放大和检测，将对抗体的检测转变为对DNA检测，实现定量抗体的分析。

本申请是通过以下方案实现的：

本申请一方面提供了一种用于免疫检测的组合物，包括第一探针和第二探针，

所述第一探针包括第一核苷酸序列连接于第一蛋白；

所述第二探针包括第二核苷酸序列连接于第二蛋白；

所述第一蛋白和第二蛋白能够同时识别并结合于目标分子，所述第一核苷酸序列和所述第二核苷酸序列能够通过DNA连接酶连接。

本申请提供的免疫检测组合物中，其可用于目标分子(一般为抗原或抗体)的免疫检测，当第一蛋白和第二蛋白均同时识别同一目标分子时，第一核苷酸序列探针和第二核苷酸序列将在空间位置上相互邻近，通过DNA连接酶，形成一段可扩增的DNA序列(本申请称为邻位连接反应)，然后以实时PCR进行放大和检测。通过本申请提供的免疫检测组合物，可以将对目标分子的检测转变成为对DNA的检测，实现定量分析。

本申请中，只有在一对探针均与目标分子结合，且相互间距离足够贴近时，邻近连接反应才能够发生，因此这种方法的非特异性检测极少，这一优点使得与常规方法相比，具有更高的特异性和检测灵敏度。

在本发明的一个具体实施方式中，所述第一蛋白、所述第二蛋白为抗体或抗原，也可以是含有双识别位点或多识别位点的抗体片段或抗原片段。

在本发明的一个具体实施方式中，还包括模板connector，所述模板connector的第一部分序列与所述第一核苷酸序列中远离所述第一蛋白的一端互补配对，所述模板connector的第二部分序列与所述第二核苷酸序列中远离所述第二蛋白的一端互补配对。