[发明专利]一种构建酿酒酵母人工小启动子文库的方法及应用

权利要求书

1.一种构建酿酒酵母人工启动子突变体文库的方法，包括如下步骤：对酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1的核苷酸序列自3’末端起的第1-6位中的全部或部分进行随机突变，得到酿酒酵母人工启动子突变体文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1的核苷酸序列如SEQ ID No.4的第29-153位所示。

3.用于筛选目的酿酒酵母人工启动子突变体的重组载体库，其特征在于：所述重组载体库中的每个重组载体均为由骨架载体片段和具有特定结构的DNA片段连接而成的双链环形DNA；所述具有特定结构的DNA片段自上游到下游依次由酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1突变体、待转录片段和终止子组成；且

所述重组载体库中的不同重组载体上的所述酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1突变体序列的自3’末端起的第1-6位核苷酸序列不同；且

所述重组载体库中的不同重组载体上的所述待转录片段和所述终止子的序列均相同；

进一步地，所述酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1的核苷酸序列如SEQ ID No.4的第29-153位所示。

4.根据权利要求3所述的重组载体库，其特征在于：所述终止子为SPG5终止子；和/或

所述待转录片段为目的基因。

5.根据权利要求3或4所述的重组载体库，其特征在于：所述骨架载体为酿酒酵母通用表达载体pRS313。

6.用于筛选目的酿酒酵母人工启动子突变体的重组酿酒酵母库，为向受体酿酒酵母中导入权利要求3-5中任一所述重组载体库后所得。

7.权利要求1或2所述方法或权利要求3-5中任一所述重组载体库或权利要求6所述重组酿酒酵母库在筛选目的酿酒酵母人工启动子突变体中的应用。

8.一种筛选目的酿酒酵母人工启动子突变体的方法，包括如下步骤：培养权利要求6所述重组酿酒酵母库，从中筛选得到符合预定条件的重组酿酒酵母株为目的重组酿酒酵母；所述目的重组酿酒酵母中所携带的所述酿酒酵母人工启动子UASF-E-C-core1突变体即为目的酿酒酵母人工启动子突变体。

9.权利要求1或2或8所述方法或权利要求3-5中任一所述重组载体库或权利要求6所述重组酿酒酵母库在酿酒酵母代谢途径的基因表达调控中的应用。

10.一种构建启动子突变体文库的方法，包括如下步骤：对启动子的Kozak区域中的全部或部分序列进行随机突变，得到启动子突变体文库；

所述启动子的Kozak区域是指启动子3’端的最后六个碱基。