[发明专利]利用BSA-seq筛选与梨果实褐皮相关联分子标记方法

说明书

本发明属于分子标记技术领域，公开了一种利用BSA‑seq筛选与梨果实褐皮性状相关联分子标记的方法，包括：获得‘新高’和‘砀山酥’杂交组合的Fsubgt;1/subgt;代群体；基因组DNA的提取纯化及混池构建；BSA‑seq分析；SSR分子标记的鉴定。本发明通过BSA‑seq技术，筛选与梨果实褐皮性状相关的分子标记，利用所获得的分子标记，有利于对目标性状的早期选择，为挖掘决定目标性状的候选基因和解析果实褐皮性状形成的分子机制打下基础，为通过分子育种途径培育梨优质品种资源提供重要的理论依据。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，尤其涉及一种利用BSA-seq筛选与梨果实褐皮性状相关联的分子标记方法。

背景技术

梨是世界主要的果树之一，具有较高的经济价值。我国梨的栽培面积及产量均居世界首位。然而，目前我国还没有选育出在世界上具有优势竞争力的梨新品种。提高梨品质已成为中国梨生产面临的一个十分突出的问题。梨的外观品质是影响其商品性的重要因素，其中，果皮色泽为重要的外观评价指标之一。研究发现，梨的褐色果皮可以保护果实免受疾病、昆虫及恶劣天气等的影响。解析梨褐色果皮的形成机制，改良果皮的色泽是梨育种工作中的重要方面。目前，关于梨果实褐皮的形成及分子调控机制还不清楚，且常规的梨育种存在效率低、周期长等问题。

在梨杂交后代中，果实的着色程度和质量均受亲本的影响。目前有关梨果实褐皮的遗传机理研究仍处于探索阶段。

分子标记是一类以分子水平上DNA序列的差异为基础的遗传标记，它直接反映了DNA水平上的遗传多样性。目前，已经有几十多种分子标记被发展利用。随着分子生物学的迅速发展，DNA分子标记技术已广泛应用于亲缘关系和遗传多样性分析，并取得很好的成绩。此外，SSR标记技术以其独特的优势也逐渐应用于果树品种鉴定方面的研究。王晶等鉴定了3个从未报道的甜樱桃品种的S基因型，验证了一种可以有效获得多态性SSR的途径，提供了9个新的多态性SSR及其等位基因大小，用12个分子标记构建了48个甜樱桃品种指纹图谱。近年来，随着基因组测序技术的飞速发展，第二代测序(短片段)数据和第三代测序(长片段)数据的综合应用，大大提升了基因组组装的完整度和准确性，为开展生物学研究提供了便利。梨基因组的揭秘为梨后基因组学的研究提供了基础。高通量测序技术能一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，对揭秘目的基因的形成机理发挥了重要的作用。BSA-seq技术，结合了高通量测序技术和分离群体分组分析法来进行基因定位，能够快速建立基因型与表型之间的高分辨率关系。目前，该技术己经广泛应用到农艺性状的基因定位研究当中。豆峻岭采用BSA-seq技术对控制西瓜果皮黄色的候选位点进行初定位，之后开发大量的分子标记，通过一系列分子生物学实验最终将候选基因定位到4号染色体上。目前，利用BSA-seq技术对于梨果实褐皮性状方面的研究较少。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)目前关于梨果实褐皮的形成及分子调控机制还不清楚，且常规的梨育种存在效率低、周期长等问题。

(2)目前利用BSA-seq技术对于梨果实褐皮性状方面的研究较少。

解决以上问题及缺陷的难度为：实验材料的获得有季节性限制，且对于材料的筛选需要以果实颜色为判断。梨的基因组尚未得到完善，需要建库之后才能筛选得到SSR标记，所需实验时间较长。

解决以上问题及缺陷的意义为：利用获得的分子标记，有利于对目标性状的早期选择，为挖掘决定目标性状的候选基因和解析果实褐皮性状形成的分子机制打下基础，为通过分子育种途径培育梨优质品种资源提供重要的理论依据。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用BSA-seq筛选与梨果实褐皮性状相关联的分子标记方法。

本发明是这样实现的，一种利用BSA-seq筛选与梨果实褐皮性状相关的分子标记方法，所述筛选分子标记方法包括以下步骤：