[发明专利]基于游离RNA检测PD-L1表达量的方法及其试剂盒

说明书

一种基于游离RNA检测PD‑L1表达量的方法及其试剂盒，该方法包括：逆转录步骤，包括将待测的游离RNA样本逆转录为cDNA；实时荧光定量PCR检测步骤，包括对cDNA中的PD‑L1基因、内参基因进行实时荧光定量PCR检测，根据PD‑L1基因、内参基因的Ct值预测待测样本所属个体的PD‑L1表达量的强弱程度。本发明作为针对无法或者难以进行组织免疫组化检测PD‑L1的患者，在使用免疫治疗方案前进行的疗效评估手段，提高患者在免疫治疗中的收益。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种基于游离RNA检测PD-L1表达量的方法及其试剂盒。

背景技术

癌症是全世界范围内影响人类健康和生命的重要因素，大多数癌症患者在确诊时已处于晚期，失去了手术机会且对放化疗等保守治疗方式不敏感，因此预后普遍偏差。随着免疫肿瘤学的不断发展，肿瘤的免疫治疗成为了继分子靶向治疗之后的新热点，其中PD-1/PD-L1信号途径为近年来免疫治疗的研究热点之一，目前也有数款针对这一信号途径的药物上市，用于黑色素瘤、肺癌、结直肠癌等癌症的治疗。但PD-1/PD-L1免疫治疗并非对每一个患者都有效，临床实验结果表明，仅有不到30％的患者能够从PD-1/PD-L1免疫治疗中获益，加之治疗费用高，且治疗周期长，若治疗无效，患者将丧失及时接受其他治疗方法的时机，更重要的是，免疫治疗引起的不良反应也不容忽视。因此，在选择免疫治疗方案前进行相应的检测以预测其疗效是非常有必要的。在基于PD-L1的免疫治疗，PD-1/PD-L1抑制剂的疗效和PD-L1的表达水平密切相关。

目前检测PD-L1的表达水平，主要使用免疫组化的方法。具体来说，是利用特异性抗体(如28-8、22C3、SP263、SP142)，通过杂交显色的方式来检测癌症组织标本中的PD-L1的表达水平。但是对于部分不能或很难获得肿瘤组织的患者，PD-L1的评估就变得十分困难。另外，目前的免疫组化方法也面临一些问题，例如在检测技术方面，不同的检测抗体、平台以及不同阈值的设定对检测结果会有不同的影响，在生物学方面，由于肿瘤内和肿瘤间异质性，检测结果可能无法真实反映PD-L1的表达水平；组织来源方面，对于细胞学标本、存档标本和新鲜标本，原发部位和转移灶中PD-L1表达水平会有差异。除此之外，目前还有通过NGS大panel检测ctDNA中肿瘤突变负荷(TMB)的方法评估免疫治疗的疗效，但是该方法检测流程复杂、成本较高，对于很多患者来说是较重的经济负担。

发明内容

根据第一方面，一种实施例中提供一种基于游离RNA检测PD-L1表达量的方法，包括：

逆转录步骤，包括将待测的游离RNA样本逆转录为cDNA；

实时荧光定量PCR检测步骤，包括对cDNA中的PD-L1基因、内参基因进行实时荧光定量PCR检测，根据PD-L1基因、内参基因的Ct值预测待测样本所属个体的PD-L1表达量的强弱程度。

根据第二方面，一种实施例中提供一种用于实时荧光定量PCR检测PD-L1基因的探针引物组合，所述探针包括如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列，所述引物包括但不限于如下核苷酸序列组合中的至少一种：

1)如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示核苷酸序列；

2)如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示核苷酸序列。

根据第三方面，一种实施例中提供一种用于实时荧光定量PCR检测PD-L1基因、内参基因的探针引物组合，用于实时荧光定量PCR检测PD-L1基因的探针包括如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列，引物包括但不限于如下核苷酸序列组合中的至少一种：

1)如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示核苷酸序列；

2)如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示核苷酸序列；