[发明专利]基于游离RNA检测PD-L1表达量的方法及其试剂盒

权利要求书

1.一种基于游离RNA检测PD-L1表达量的方法，其特征在于，包括：

逆转录步骤，包括将待测的游离RNA样本逆转录为cDNA；

实时荧光定量PCR检测步骤，包括对cDNA中的PD-L1基因、内参基因进行实时荧光定量PCR检测，根据PD-L1基因、内参基因的Ct值预测待测样本所属个体的PD-L1表达量的强弱程度。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，包括：将待测的游离RNA样本、用于对PD-L1基因进行实时荧光定量PCR检测的探针引物组合、用于对内参基因进行实时荧光定量PCR检测的探针引物组合加入一步法逆转录-实时荧光定量PCR反应体系中，依次进行逆转录、实时荧光定量PCR检测，根据PD-L1基因、内参基因的Ct值预测待测样本所属个体的PD-L1表达量的强弱程度；

和/或，根据PD-L1基因、内参基因的Ct值差值的绝对值预测待测样本所属个体的PD-L1表达量的强弱程度。

3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，根据PD-L1基因、内参基因的Ct值预测待测样本所属个体的PD-L1表达量的强弱程度的方法如下：

所述PD-L1基因与内参基因的Ct差值的绝对值≥第一阈值时，则预测为PD-L1弱表达；

第二阈值≤所述PD-L1基因与内参基因的Ct差值的绝对值＜第一阈值时，则预测为PD-L1中表达；

所述PD-L1基因与内参基因的Ct差值的绝对值＜第二阈值时，则预测为PD-L1强表达。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述第一阈值为15；

和/或，所述第二阈值为10。

5.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，用于对PD-L1基因进行实时荧光定量PCR检测的探针包括如SEQ ID NO:3所示核苷酸序列；

和/或，用于对PD-L1基因进行实时荧光定量PCR检测的引物选自如下核苷酸序列组合中的至少一种：

1)如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2所示核苷酸序列；

2)如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示核苷酸序列；

和/或，所述内参基因选自β-Actin、GAPDH、U6、HMBS、B2M、TUBB、SDHA、18S rRNA、ACTB、RPL4、PPIA、HPRT1、YWHAZ、RPP30、ERG中的至少一种；

和/或，所述内参基因选自β-Actin，用于对内参基因进行实时荧光定量PCR检测的的探针包括如SEQ ID NO:6所示核苷酸序列；

和/或，所述内参基因选自β-Actin，用于对内参基因进行实时荧光定量PCR检测的引物选自如下核苷酸序列组合中的至少一种：

1)如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5所示核苷酸序列；

2)如SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10所示核苷酸序列；

和/或，实时荧光定量PCR反应的循环数为40-50，循环反应时收集荧光；

和/或，实时荧光定量PCR反应时，每个循环反应如下：94-98℃，10-20s；56-62℃，15-35s；

和/或，实时荧光定量PCR反应时，循环反应之前的程序依次如下：40-45℃，94-98min；94-98℃，1-5min；

和/或，用于对PD-L1基因进行实时荧光定量PCR检测的探针的5’端修饰有第一标记分子，3’端修饰有第二标记分子；用于对内参基因进行实时荧光定量PCR检测的探针的5’端修饰有第三标记分子，3’端修饰有第四标记分子；所述第一标记分子、第二标记分子物理靠近时会发生荧光能量共振转移，所述第三标记分子、第四标记分子物理靠近时会发生荧光能量共振转移；

和/或，所述第一标记分子、所述第三标记分子为荧光报告基团，所述第二标记分子、第四标记分子为荧光淬灭基团；

和/或，所述第一标记分子所发出的荧光波长不同于所述第三标记分子所发出的荧光波长；

和/或，所述荧光报告基团选自FAM、HEX、VIC、ROX、Cy5中的至少一种；

和/或，所述第二标记分子、第四标记分子为相同或不同的荧光淬灭基团；

和/或，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、MGB中的至少一种。