[发明专利]一种奥曲肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种奥曲肽的制备方法，包括以下步骤：(1)采用树脂为固相载体，与奥曲肽C端氨基酸酯化，制备氨基酸‑树脂复合物；(2)采用Fmoc策略固相多肽合成方法，制备保护的奥曲肽‑树脂复合物；(3)采用切割试剂脱除侧链保护基，制备脱保护的奥曲肽‑树脂复合物；(4)加入还原剂将奥曲肽从树脂上裂解下来，在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品；(5)采用高效液相法纯化粗品，得到奥曲肽精品。本发明提供一种简便、低成本、收率和纯度皆较高的奥曲肽制备方法，解决目前奥曲肽制备成本高或副反应多或工艺复杂或产率较低的问题。

技术领域：

本发明属多肽化学领域，特别涉及一种奥曲肽的制备方法。

背景技术：

奥曲肽(式1)为分子内含有一个二硫键的环八肽，是一种人工合成的人生长抑素的八肽衍生物，其作用与天然生长抑素相似。化学名为D-苯丙氨酰-L-半胱氨酰-L-苯丙氨酰-D-色氨酰-L-赖氨酰-L-苏氨酰-L-半胱氨酰-L-苏氨醇环-(2→7)-二硫化物；英文名为Octreotide Acetate。瑞士山德士(Sandoz)公司于1982年合成，1988年美国FDA批准醋酸奥曲肽用于胃肠道分泌类肿瘤和垂体肿瘤及肢端肥大症的治疗；1998年美国FDA再次批准醋酸奥曲肽用于肢端肥大症的治疗。

公开的奥曲肽制备方法主要有两种：固相方法和液相方法。专利ZL00134258.4采用液相方法合成，步骤繁琐，生产周期长。目前固相方法仍然是制备奥曲肽的主流方法，一类方法，如专利申请CN201010165270.X、专利ZL200510029221.2及ZL201210352668.3采用氯树脂及氯树脂类似物，与苏氨醇连接后合成奥曲肽。这类方法的缺点是氯树脂与苏氨醇的连接效率很低，导致过量苏氨醇及树脂的浪费，同时会增加后续洗涤树脂所需的溶剂消耗量以及最终的成本。另一类方法是采用添加linker的方案解决苏氨醇与树脂连接效率低的问题，如专利申请CN201610938844.X、专利ZL200510024502.9及ZL2004100108332。该类方法需要先将苏氨醇与linker在通过液相反应合成并纯化后才能用于奥曲肽的制备，增加了工艺周期且额外增加了一个原料的质控，导致工艺复杂化。以上两种方法均需要用价格昂贵的苏氨醇作为原料，且苏氨醇的利用率也不高，导致生产成本高昂。第三类固相合成方法采用酯还原的方法得到含有苏氨醇的奥曲肽，以解决成本高的问题，如专利申请CN02137521.6，采用Boc-Thr(Ac)-Wang树脂，TFA脱Boc保护基，然后依次缩合Fmoc氨基酸，用哌啶脱除Fmoc保护基后缩合。合成结束后用硼氢化钠固相还原酯为醇，得到奥曲肽，收率仅为10.7％。进一步存在的问题是：采用TFA脱除Boc保护基时，氨基酸Thr会被切割下来，导致产率降低；另外在用哌啶脱除Fmoc时，Thr侧链保护基Ac易脱落，产生副反应。专利ZL201310333598.1采用Boc-Thr(tBu)-OH连接到氯甲基树脂上，盐酸/异丙醇脱Boc，Pd/C氢化切割及还原成醇，主要存在的问题是：先脱除巯基保护基Trt再氢化的方式，会导致Pd/C中毒失效；并需要在液相中环化形成二硫键，产生大量的废液。

发明内容

本发明的目的是提供一种简便、低成本、收率和纯度皆较高的奥曲肽制备方法，解决目前奥曲肽制备成本高或副反应多或工艺复杂或产率较低的问题。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种奥曲肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)将Fmoc-Thr(tBu)-OH及酯化试剂加入到树脂中进行酯化反应，得到Fmoc-Thr(tBu)-树脂复合物；

(2)按照固相多肽合成的方法，根据奥曲肽的序列，将保护氨基酸按C端至N端的顺序逐个偶联到步骤(1)所得树脂上获得保护的奥曲肽-树脂复合物；

(3)向保护的奥曲肽-树脂复合物中加入切割试剂，脱除多肽侧链保护基，得到脱保护的奥曲肽-树脂复合物；