[发明专利]一种奥曲肽的制备方法

权利要求书

1.一种奥曲肽的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)将Fmoc-Thr(tBu)-OH及酯化试剂加入到树脂中进行酯化反应，得到Fmoc-Thr(tBu)-树脂复合物；

(2)按照固相多肽合成的方法，根据奥曲肽的序列，将保护氨基酸按C端至N端的顺序逐个偶联到步骤(1)所得树脂上获得保护的奥曲肽-树脂复合物；

(3)向保护的奥曲肽-树脂复合物中加入切割试剂，脱除多肽侧链保护基，得到脱保护的奥曲肽-树脂复合物；

(4)向脱保护的奥曲肽-树脂复合物中加入还原剂将步骤(1)中酯化反应形成的酯键还原为苏氨醇，同时将奥曲肽从树脂上裂解下来，并在裂解的同时将二硫键进行环化，得到奥曲肽粗品；

(5)将奥曲肽粗品分离纯化，得到奥曲肽。

2.根据权利要求1所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的树脂为PAM树脂、HMBA树脂或Merrifield树脂。

3.根据权利要求1或2所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述的酯化试剂为DIC、HOBt、DMAP、氟化钾中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(1)中各物质间的比例为n[Fmoc-Thr(tBu)-OH]：n(DIC)：n(HOBt)：n(DMAP)：n(氟化钾)：n(树脂)＝4～1：4～1：4～1：0.5～0.1：4～1：1。

5.根据权利要求1所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(2)中奥曲肽-树脂复合物是向步骤(1)得到的Fmoc-Thr(tBu)-树脂复合物中加入Fmoc脱保护试剂脱除Fmoc保护基，反应结束后洗涤树脂，得到Thr(tBu)-树脂，然后向Thr(tBu)-树脂复合物中加入奥曲肽的C端第二个氨基酸和缩合试剂进行缩合反应，缩合反应结束后洗涤树脂；按照奥曲肽从C端到N端的顺序，更换氨基酸，重复Fmoc脱保护反应和缩合反应，得到保护的奥曲肽-树脂复合物。

6.根据权利要求5所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：所述Fmoc脱保护试剂是体积比为1：1～4的哌啶与二甲基甲酰胺，所述Fmoc脱保护反应的温度为20～60℃。

7.根据权利要求5所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：所述的缩合试剂为缩合试剂1、缩合试剂2及缩合试剂3的一种或多种混合；其中，缩合试剂1为DCC、DIC、HBTU、HATU、BOP、PyBOP中的一种，缩合试剂2为HOBt、HOAt中的一种，缩合试剂3为DIEA。

8.根据权利要求7所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于所述的各试剂的物质的量的比例为：氨基酸：缩合试剂1：缩合试剂2：缩合试剂3：树脂＝6～2：6～2：6～2：12～4：1。

9.根据权利要求7或8所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于DCC或DIC不与DIEA组合应用。

10.根据权利要求1所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述的切割试剂为TFA混合液，优选地，所述TFA混合液中TFA的体积比不小于80％。

11.根据权利要求10所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：所述TFA混合液除了三TFA还包括重蒸水、TES、DTT、Phenol、Thioanisole、NH₄I、TIS、Anisole和EDT中的一种或多种混合。

12.根据权利要求1所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述的还原剂为氯化锂混合液。

13.根据权利要求12所述的奥曲肽的制备方法，其特征在于：所述氯化锂混合液除了氯化锂还包括硼氢化钠、硼氢化锂、硼氢化钙、硼氢化钾以及硼氢化钠中的一种或多种混合。