[发明专利]lmo2733作为靶点在制备检测、鉴别或诊断单增李斯特菌的试剂中的应用

权利要求书

1.lmo2733作为靶点在制备检测、鉴别或诊断单增李斯特菌的试剂中的应用。

2.一种用于检测单增李斯特菌的试剂，其特征在于：包含能够检测lmo2733的引物。

3.根据权利要求2所述的用于检测单增李斯特菌的试剂，其特征在于：

能够检测lmo2733的引物为PCR引物组，包括：

上游引物F：5′-GCAGCATTGATCCAACAAATG-3′；

下游引物R：5′-CGTAGCGTACGAAGATATTCG-3′。

4.根据权利要求2所述的用于检测单增李斯特菌的试剂，其特征在于：

能够检测lmo2733的引物为LAMP引物组，包括：

上游外引物F3：5′-GGTTTATTGCCATAGGAGAGG-3′；

上游内引物FIP：5′-GTAACCGCACCAAGAGAAGCGCTACAAAATCCGCTTATCAC-3′；

下游内引物BIP：5′-TACTTGGTGCAGTACAATGGCGCCCAGAAATTTTCAACGAG-3′；

下游外引物B3：5′-ACAATTAAACCGATCGCATAG-3′。

5.权利要求2～4任一项所述的用于检测单增李斯特菌的试剂在制备检测、鉴别或诊断单增李斯特菌的试剂盒中的应用。

6.一种用于检测单增李斯特菌的试剂盒，其特征在于：含有权利要求2～4任一项所述的用于检测单增李斯特菌的试剂。

7.一种检测单增李斯特菌的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)提取样品DNA；

(2)以步骤(1)的样品DNA为模板，利用权利要求2～4任一项所述的用于检测单增李斯特菌的试剂进行PCR反应或LAMP反应；

(3)将步骤(2)得到的PCR反应产物进行电泳检测，若扩增到目标条带，则为单增李斯特菌阳性；若未扩增到任何条带，则为不含单增李斯特菌的阴性；

(4)将步骤(2)得到的LAMP反应产物进行肉眼可视化观察，采用HNB染料作为显色剂时，若产物颜色为天蓝色，则为单增李斯特菌阳性；若产物为紫罗兰色，则为不含单增李斯特菌的阴性；或者，将步骤(2)得到的LAMP反应产物进行进行电泳检测，若扩增到梯度带，则为单增李斯特菌阳性；若未扩增到任何条带，则为不含单增李斯特菌的阴性。

8.根据权利要求7所述的检测单增李斯特菌的方法，其特征在于：

步骤(2)中，PCR反应的体系采用25μL反应体系，包括1.5U无3′外切酶活性的taq酶，2.5μL 10Xtaq酶Buffer，0.2mM的dNTP，2mM MgCl₂，各0.2μM的引物F和引物R，2μL的DNA模板，再用ddH₂O补齐到25μL；

反应条件为，95℃预变性3min；循环反应为95℃变性15s，53℃退火30s，72℃延伸110s，30个循环；最后72℃延伸10min。

9.根据权利要求7所述的检测单增李斯特菌的方法，其特征在于：

步骤(2)中，LAMP扩增体系共25μL，包括8U Bst DNA聚合酶，1×Bst DNA聚合酶缓冲液，F3和B3各0.2μM，FIP和BIP各1.6μM，dNTPs 1.6μM，甜菜碱0.8M，硫酸镁8mM，模板DNA 2μL，HNB染料0.12mM，去离子水补齐；

LAMP反应条件为65℃扩增60min，随后90℃灭酶2min。

10.根据权利要求7或8所述的检测单增李斯特菌的方法，其特征在于：

步骤(2)中，利用权利要求3所述的用于检测单增李斯特菌的试剂进行PCR反应时，步骤(3)中的目标条带的长度为1653bp。