[发明专利]重组酶组合物和使用方法

权利要求书

1.一种用于修饰DNA的系统，该系统包含：

a)重组酶多肽，该重组酶多肽包含表3A、3B、或3C的氨基酸序列，或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列，或编码该重组酶多肽的核酸；以及

b)双链插入DNA，该双链插入DNA包含：

(i)与(a)的重组酶多肽结合的DNA识别序列，

所述DNA识别序列具有第一副回文序列和第二副回文序列，其中每个副回文序列为约15-35或20-30个核苷酸，并且该第一和第二副回文序列一起构成出现在如下核苷酸序列内的副回文区，该核苷酸序列为表2A、2B或2C的左区列或右区列中的核苷酸序列，或与所述副回文区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的核苷酸序列，或相对于所述副回文区具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个序列改变(例如，取代、插入、或缺失)的核苷酸序列，并且

所述DNA识别序列进一步包含约2-20个核苷酸的核心序列，其中该核心序列位于该第一和第二副回文序列之间，以及

(ii)异源对象序列。

2.一种真核细胞(例如，哺乳动物细胞，例如，人细胞)，其包含：重组酶多肽，该重组酶多肽包含表3A、3B、或3C的氨基酸序列，或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸序列，或编码该重组酶多肽的核酸。

3.一种真核细胞(例如，哺乳动物细胞，例如，人细胞)，其包含：

(i)DNA识别序列，所述DNA识别序列包含第一副回文序列和第二副回文序列，

其中每个副回文序列为约15-35或20-30个核苷酸，并且该第一和第二副回文序列一起构成出现在如下核苷酸序列内的副回文区，该核苷酸序列为表2A、2B或2C的左区列或右区列中的核苷酸序列，或与所述副回文区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的核苷酸序列，或相对于所述副回文区具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个序列改变(例如，取代、插入、或缺失)的核苷酸序列，

其中所述DNA识别序列进一步包含约2-20个核苷酸的核心序列，其中该核心序列位于该第一和第二副回文序列之间；以及

(ii)异源对象序列。

4.一种修饰真核细胞(例如，哺乳动物细胞，例如，人细胞)的基因组的方法，该方法包括使该细胞与以下接触：

a)重组酶多肽，该重组酶多肽包含表3A、3B、或3C的氨基酸序列，或与其具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的序列，或编码该重组酶多肽的核酸；以及

b)插入DNA，该插入DNA包含：

(i)与(a)的重组酶多肽结合的DNA识别序列，所述DNA识别序列具有第一副回文序列和第二副回文序列，其中每个副回文序列为约15-35或20-30个核苷酸，并且该第一和第二副回文序列一起构成出现在如下核苷酸序列内的副回文区，该核苷酸序列为表2A、2B或2C的左区列或右区列中的核苷酸序列，或与所述副回文区具有至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的核苷酸序列，或相对于所述副回文区具有不超过1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个序列改变(例如，取代、插入、或缺失)的核苷酸序列，

其中所述DNA识别序列进一步包含约2-20个核苷酸的核心序列，其中该核心序列位于该第一和第二副回文序列之间，以及

(ii)异源对象序列，

从而对该真核细胞的基因组进行修饰。