[发明专利]醋酸曲普瑞林的合成方法

说明书

本发明公开了醋酸曲普瑞林的合成方法，包括，(1)在树脂上按照固相合成的方法依次连接具有保护基团的氨基酸，获得保护十肽树脂；(2)在裂解液作用下将曲普瑞林从树脂上切割得到曲普瑞林的粗品料液；(3)析出粗品进行料液分离后干燥得到醋酸曲普瑞林粗品。本发明在裂解液中加入了二价金属盐作为电子捕捉辅助剂，大幅提高了裂解过程中的电子捕捉效率，进而提高整个裂解后多肽粗品的收率与纯度；在加入电子捕捉剂辅助剂的情况下，对比不加入的情况，很好的缩短多肽裂解的时间，减少多肽在裂解过程中杂质的生产，裂解后粗品的纯度达到95％以上。电子捕捉剂助剂用量很少，催化剂量即可达到很好的裂解效果，回收后可以反复套用，成本低廉。

技术领域

本发明涉及多肽的合成方法，尤其涉及醋酸曲普瑞林的合成方法，属于醋酸曲普瑞林的合成领域。

背景技术

曲普瑞林是一种促性腺素释放素激动剂，是由10个氨基酸组成的多肽，其序列为：pGlu-His-L-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH₂。

多肽合成方法一般分为液相合成与固相合成两大类，这其中液相合成由于周期长、后处理繁琐、总收率偏低等原因目前已经很少应用在多肽合成领域。而固相合成由于操作简单，在简单反应器皿中即可完成，避免了液相合成中冗长的结晶与分离过程，因此得到了更为广泛的应用。

在现有技术中，在多肽在固相合成完成后的裂解是一个多肽合成的关键步骤，简单可以概况如下：

将固相合成后的多肽从树脂上分离并去掉多肽侧链和主链多余的临时保护基团。大致流程如下：

1)准备树脂:这里只需要树脂里面的溶剂成分被洗涤掉并充分干燥树脂，理想状态是：像干燥的沙子一样，不容易占到其它物体的表面，例如瓶子或者纸。

2).切割液的选择和配置:这里常用的组合很多，针对不同的多肽序列，选择不同的切割液种类。

这里主要列几种常见的切割液比例。

①TFA：H₂O＝95％：5％、TFA：H₂O＝97.5％：2.5％；

②TFA：H₂O：TIS＝95％：2.5％：2.5％；

③三氟乙酸：茴香硫醚：1，2-乙二硫醇：苯酚：水＝87.5：5：2.5：2.5：2.5等。

3).裂解过程:常规的时间在2.5小时左右，要不停地震荡，温度为室温。

一些非常容易氧化或者变质的多肽，还需要排除容器里面的空气(用氮气代替)，有时还需要适当降低环境的温度，例如控制环境的温度0-10℃。

4).抽料：收集滤液，此时的滤液里面含有被切割下来的多肽和一部分侧链保护基团。一些不溶于TFA的保护基团，例如Pbf，是一种白色漂浮物，同树脂一起被过滤掉了。

5).沉淀、离心、洗涤:沉淀用的是冰乙醚，这里的冰字是要求乙醚的温度要很低，例如放置在-20℃的冰箱里面。当然使用常温的乙醚，也是可以的。离心使用的是能达到3000转每分钟的离心机，离心后将上清液弃去，剩余物反复洗涤后，出料真空干燥后即可得到多肽粗品。

从上述整个实验过程中可以看出，整个操作的核心过程在于裂解过程，因此裂解液的配置与反应是成败的关键。