[发明专利]一种通用型TRUCK-T细胞、其制备方法以及用途

权利要求书

1.一种制备通用型人类TRUCK-T细胞的方法，包括:

(i)从淋巴系统健康的受试者获得T细胞，通过基因编辑技术破坏所述人类T细胞中：

14号染色体的TRAC基因区域；和

15号染色体的B2M基因区域；并且

(ii)利用同源重组原理把CAR分子和/或外源细胞因子基因序列插入到TRAC和/或B2M切割位点。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，CAR分子利用T细胞自身的TRAC的启动子启动表达，外源细胞因子基因序列还包括NFAT序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述TRAC基因区域为14号染色体第23016448位至第23016490位；所述B2M基因区域为15号染色体第45003745位至第45003788位。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，利用同源重组原理把CAR分子插入到TRAC切割位点；把外源细胞因子基因序列插入到B2M切割位点。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述基因编辑技术包括基于锌指核酸酶的基因编辑技术、TALEN基因编辑技术或CRRISPR/Cas基因编辑技术，优选地，所述CRRISPR/Cas基因编辑技术包括CRRISPR/Cas9技术。

6.根据权利要求5所述的方法，其中，在使用所述CRRISPR/Cas9技术时，针对待编辑的目标TRAC基因区域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.：2～5的sgRNA，而针对待编辑的目标B2M基因区域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.:15～22的sgRNA

优选地，在使用所述CRRISPR/Cas9技术时，针对待编辑的目标TRAC基因区域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.：2的sgRNA，而针对待编辑的目标B2M基因区域所使用的sgRNA包括SEQ ID No.:20的sgRNA。

7.根据权利要求1所述的方法，其中，所述CAR靶向的靶标包括间皮素、CD19、CD123、CD20、GPC3、Her2、EGFR、NY-ESO-1、MUC1、EBV、PMSA、GD2、TAA。

8.根据权利要求1或7所述的方法，其中，所述外源细胞因子包括：IL-12、IL17、CCL19。

9.使用根据权利要求1至8中任一项所述的方法制成的通用型TRUCK-T细胞。

10.根据权利要求9所述通用型TRUCK-T细胞在制备用于治疗患者中的癌症的药物的用途。

11.根据权利要求10所述的用途，其中所述癌症是实体瘤，优选地，所述实体瘤是高表达间皮素的实体瘤，包括卵巢癌、胃癌和肺癌。