[发明专利]一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用

说明书

本发明涉及基因检测技术领域，涉及一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用。针对现有技术中新型冠状病毒检测试剂盒检测耗时长，需要特殊设备，DNA不易降解易污染，灵敏度低且特异性不强的技术问题，本申请提供一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用，没有RNA的提取过程，不需要PCR仪器，基于RNA恒温扩增，且扩增产物为RNA，易降解，气溶胶污染可能性极低；特别设计的引物和探针具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势。

技术领域

本发明涉及基因检测技术领域，具体地，涉及一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用。

背景技术

新型冠状病毒属于β属的冠状病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，直径60～140nm。临床主要表现为发热、干咳、乏力，重症患者逐渐出现呼吸困难和/或低氧血症等较严重疾病；严重者快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克以及难以纠正的代谢性酸中毒和凝血功能障碍。新型冠状病毒为RNA正链病毒，与SARS冠状病毒序列相似性达79.6％。2020年 2月11日，国际病毒学分类委员会暂将新型冠状病毒命名为SARS-CoV-2。

准确快速地甄别出SARS-CoV-2感染者并对其实施隔离是目前疫情防控的最有效手段。当前，SARS-CoV-2的检测主要是基于核酸和抗体检测两种，基于核酸检测的实时荧光RT-PCR 方法是SARS-CoV-2检测的主要方法。已上市或者专利公布的核酸检测试剂均为液体检测试剂，需要先配现用，对实验和技能要求比较高；试剂盒需要冷链运输，增加了检测成本。而已上市的胶体金检测试剂检测灵敏度相对较低，存在一定的假阴和假阳性风险。其他公布的基于新型冠状病毒核酸检测技术的如Crispr技术和RT-LAMP技术。虽然可以实现恒温检测，由于其扩增产物为DNA，存在一定程度的污染风险。在RNA恒温扩增技术的基础上，结合胶体金层析技术，建立一种操作简单、快速、价格低廉的2019-nCoV的诊断方法具有非常重要的意义。

中国专利申请公布号CN111187860A，发明名称为“新型冠状病毒多重PCR快速检测试剂盒”，公开了的新型冠状病毒多重PCR快速检测试剂盒包括：PCR反应液冻干粉、引物池冻干粉和缓冲液，其中所述引物池冻干粉包括序列表所列的引物对和荧光探针。该方案针对此类多重PCR来检测SARS-CoV-2做了引物的体系优化，并设计了全新的引物和探针池，可以达到在临床上灵敏、特异性地满足对这新冠病毒的早期快速检测。但该方案需要经过磁珠法或者柱子法核酸提取病毒RNA，需要特殊的仪器，在实际检测中易污染，无法即时检测，不能在基层医疗单位检测。

鉴于以上所述疫情防控对于病原体快速检测的需求，需要一种可即时检测、不易污染、灵敏度高、特异性强，能够在基层医疗单位检测的新型冠状病毒检测方法。

发明内容

1、要解决的问题

针对现有技术中新型冠状病毒检测试剂盒检测耗时长，需要特殊设备，DNA不易降解易污染，灵敏度低且特异性不强的技术问题，本申请提供一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用，没有RNA的提取过程，不需要PCR仪器，基于RNA恒温扩增，且扩增产物为RNA，易降解，气溶胶污染可能性极低；特别设计的引物和探针具有灵敏度高、特异性强以及操作简单的优势。

2、技术方案

为达到上述目的，提供的技术方案为：

本发明的一种新型冠状病毒扩增试剂，包含ORF1ab基因和/或N基因扩增试剂；所述 ORF1ab基因扩增试剂含有ORF1ab基因扩增引物，所述ORF1ab基因扩增引物序列如SEQID NO:1-2所示；所述N基因检测试剂含有N基因扩增引物，所述N基因扩增引物序列如SEQID NO:3-4所示。

一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，包括所述的新型冠状病毒扩增试剂。