[发明专利]一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒及应用在审

申请号：	202011620381.5	申请日：	2020-12-30
公开（公告）号：	CN112646929A	公开（公告）日：	2021-04-13
发明（设计）人：	刘文干;朱丽君;韦玉军;王娟;桂林;李成俊	申请（专利权）人：	安徽安龙基因科技有限公司
主分类号：	C12Q1/70	分类号：	C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
代理公司：	安徽知问律师事务所 34134	代理人：	代群群
地址：	243000 安徽省合肥市庐阳工***	国省代码：	安徽;34
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摘要：
搜索关键词：	一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒应用
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【权利要求书】：

1.一种新型冠状病毒扩增试剂，其特征在于：包含ORF1ab基因和/或N基因扩增试剂；所述ORF1ab基因扩增试剂含有ORF1ab基因扩增引物，所述ORF1ab基因扩增引物序列如SEQ IDNO:1-2所示；所述N基因检测试剂含有N基因扩增引物，所述N基因扩增引物序列如SEQ IDNO:3-4所示。

2.一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：包括权利要求1所述的新型冠状病毒扩增试剂。

3.根据权利要求2所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括检测试剂；所述检测试剂包含ORF1ab基因检测探针，所述ORF1ab基因检测探针序列如SEQ ID NO:5-9所示；所述检测试剂包含N基因检测探针，所述N基因检测探针序列如SEQ ID NO:10-14所示。

4.根据权利要求3所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述扩增试剂还含有ACTB内控基因扩增引物，所述ACTB内控基因扩增引物的序列如SEQ ID NO:15-16所示；所述检测试剂还包含ACTB内控基因检测探针，所述ACTB内控基因检测探针序列如SEQ ID NO:17-21所示。

5.根据权利要求4所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂还含有胶体金探针，所述胶体金探针5’端被巯基化修饰，探针序列如SEQ ID NO:22所示。

6.根据权利要求5所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括由包被探针包被好的硝酸纤维素膜；所述包被探针包括：

ORF1ab包被探针，探针序列如SEQ ID NO:23所示；

N基因包被探针，探针序列如SEQ ID NO:24所示；

内控ACTB包被探针，探针序列如SEQ ID NO:25所示；

质控包被探针，探针序列如SEQ ID NO:26所示。

7.根据权利要求6所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述的包被探针5’端含有1～10个polyT碱基，且5’端标记生物素或者地高辛。

8.根据权利要求7所述的一种新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括检测试纸条；所述检测试纸条由吸水纸、包被好的硝酸纤维素膜、样品垫从上到下依次固定于PVC底板上。

9.根据权利要求2-8任一项所述的新型冠状病毒核酸层析检测试剂盒的应用方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

(1)使用样本释放剂释放病毒核酸，所述样本释放剂包含月桂酰肌氨酸钠、DTT、Tris-HCl、EDTA和SDS；

(2)使用扩增试剂扩增病毒核酸得到RNA扩增产物，所述扩增试剂包括TMA扩增反应液和TMA扩增酶；所述扩增反应液包含聚合酶缓冲液、逆转录酶缓冲液、DMSO、dNTPs、NTP和扩增引物；

(3)将RNA扩增产物与检测液混合后置于检测试纸条上层析，所述检测液包含ORF1ab基因检测探针、N基因检测探针和胶体金探针。