[发明专利]含有特异性分子靶标的致泻大肠埃希氏菌标准参考菌株及其检测和应用

说明书

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及含有特异性分子靶标的致泻大肠埃希氏菌标准参考菌株及其检测和应用。本发明的致泻大肠埃希氏菌(菌株编号为：PY009‑2、3025B1)，具有标准的大肠埃希氏菌菌体显微形态和生理生化特征，可用于检验大肠埃希氏菌特征和验证显色平板的准确性。菌株携带毒力基因具有典型代表性，且具有特异性分子标记，遗传进化方面有特殊意义，能反映中国地区遗传背景，可作为参考菌株用于科学研究。

技术领域

本发明涉及生物工程领域，尤其涉及含有特异性分子靶标的致泻大肠埃希氏菌标准参考菌株及其检测和应用。

背景技术

腹泻性疾病是世界范围内的一个重要公共卫生问题，每年因感染性腹泻死亡的人数超过200万，而在发展中国家，每年因腹泻性疾病死亡的人数高达1000万，给全球公共卫生行业造成了巨大经济损失，也给人民的生命健康构成了重要威胁。引起腹泻的各类病原中，致泻大肠埃希氏菌(Diarrhoeagenic Escherichiacoli，DEC)是重要的病原菌之一，广泛存在各类食品中，是我国常见重要的食源性致病菌，可引起不同程度腹泻疾病甚至死亡。根据其毒力和致病特点可分为五类，肠致病性大肠埃希氏菌(EPEC)，肠产毒大肠埃希氏菌(ETEC)，肠侵袭性大肠埃希氏菌(EIEC)，产志贺毒素大肠埃希氏菌(STEC)和肠集聚性大肠埃希氏菌(EAEC)。了解该菌的流行特征及遗传进化是有效防控该菌所致的食源性疾病的基础，而是否使用了合适的标准参考菌株决定了研究结果的可靠性。

2017年6月23日之前，我国食品中致泻大肠埃希氏菌检验主要执行GB/T4789.6—2003《食品卫生微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》国家标准。致泻大肠埃希氏菌的鉴定主要采用传统血清分型方法。按照WHO1987年公布的O抗原类型，确定血清组和血清型。传统的血清学检测方法操作繁琐，交叉凝集现象普遍，容易产生假阳性结果。这些血清组包括了所有致泻大肠埃希氏菌，无法准确地区分各个致病类型菌株。为与国际接轨，我国新修订了食品中致泻大肠埃希氏菌检测国家标准GB4789.6-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》，以毒力基因作为不同致泻大肠埃希氏菌致病类型分类鉴定依据，并于2017年6月23日正式实施。新检测标准对各类致病菌株进行了明确区分。然而目前，我国仍缺乏代表性食品分离株作为标准对照菌株，现用标准菌株大部分为国外临床来源的菌株，并不能很好地反映该菌在食品中的传播特征。

此外，目前报道中所采用的保护剂基本用于定性储存大肠埃希氏菌，如薛蕾等人脱脂奶粉10％，海藻糖2％，蔗糖3％，谷氨酸钠1.5％，麦芽糊3％，抗坏血酸钠0.05％，其冻干存活率仅为53.19％。如中国专利CN107190046采用12％海藻糖，0.5％脱脂奶，仅能在-18℃条件下能保证菌含量在一定范围内。又如中国专利CN102140423B采用0.1-10质量份的水溶性糖、0.1～5质量份的脱脂奶粉、0.1-20质量份的明胶、0-10质量份的活性炭作为定量化保存的保护剂，该保护剂并没有提到冻干存活率的高低，且由于保护剂中含有一定浓度的明胶，在常温条件下或在冬天使用时其溶解度受到影响，溶解速度较慢；此外该保护剂中含有活性炭，活性炭不溶于水溶液，冻干后沉在瓶底，且复苏时，散落在平板表面，影响美观以及菌落的自动计数。因此，提供一种可长期保存定量化大肠埃希氏菌的冻干保护剂具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供两株致泻大肠埃希氏菌及其应用，本发明的两株致泻大肠埃希氏菌是中国地区的食品分离菌株，该菌株具有典型的致病性大肠埃希氏菌生理生化特性，携带特异性分子标记，能较好地反映该菌在中国地区的遗传背景。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

提供一株致泻大肠埃希氏菌，是致泻大肠埃希氏菌(DiarrhoeagenicEscherichiacoli)PY009-2，其分类命名为致泻大肠埃希氏菌(DiarrhoeagenicEscherichiacoli)，已于2019年10月27号保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC 60873。