[发明专利]一种含氨基小分子蘑菇毒素的检测方法以及一种试剂盒

权利要求书

1.一种含氨基小分子蘑菇毒素的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将待测样本用提取溶剂进行提取，将所得提取液离心，得到上清液；

（2）将所述上清液、四硼酸钠缓冲液和芴甲氧羰酰氯溶液混合进行衍生化反应，将所得衍生化反应液用有机溶剂进行第一萃取，得到下层溶液；所述有机溶剂包括正戊烷、正己烷、环己烷和石油醚中的一种或几种；

（3）将所述下层溶液的pH值调节至酸性，然后用二氯甲烷进行第二萃取，得到二氯甲烷萃取液；

（4）将所述二氯甲烷萃取液用氮气吹干后复溶，得到待测液；

（5）将所述待测液进行液相色谱串联质谱分析，得到谱图，根据谱图峰面积和标准曲线计算得到待测样本中含氨基小分子蘑菇毒素的含量；所述标准曲线为含氨基小分子蘑菇毒素浓度和含氨基小分子蘑菇毒素衍生化产物峰面积的关系曲线；

所述含氨基小分子蘑菇毒素为鹅膏蕈氨酸、毒蝇母、2-氨基-5-己炔酸、2-氨基-4-戊炔酸和2-氨基-4,5-己二烯酸；所述衍生化反应的温度为25~45 ℃，时间为10~20 min；

所述待测样本为蘑菇、尿液或血浆，当所述待测样本为蘑菇时，所述提取溶剂为乙腈水溶液或甲醇水溶液；当所述待测样本为尿液或血浆时，所述提取溶剂为乙腈；

所述液相色谱串联质谱分析的液相色谱条件包括：流动相包括流动相A和流动相B，所述流动相A为甲醇，流动相B为含氨水的醋酸铵水溶液，所述含氨水的醋酸铵水溶液中氨水的质量分数为0.05%，醋酸铵的浓度为5 mmol/L；色谱柱为ZORBAX eclipse plus C18柱；梯度洗脱程序为：0min，10%A；1min，10%A；9min，100%A；12min，100%A；12.2min，10%A；15min，10%A。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述提取为超声提取或振荡提取，所述提取的时间为5~10 min。

3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述上清液、四硼酸钠缓冲液和芴甲氧羰酰氯溶液的体积比为1~5: 1 : 1~2；所述四硼酸钠缓冲液的浓度为0.1~0.5 mol/L，所述四硼酸钠缓冲液的pH值为8~9；所述芴甲氧羰酰氯溶液的浓度为0.5~5 mg/mL。

4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一萃取的次数为1~3次，单次萃取用有机溶剂和衍生化反应液的体积比为1~3 : 1。

5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，调节所述下层溶液pH值用调节剂为盐酸溶液，将所述下层溶液的pH值调节至2~3；所述下层溶液和二氯甲烷的体积比为1:1~2。

6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述复溶用溶剂为甲醇水溶液。

7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱分析使用的质谱为三重四级杆质谱，采用的模式为多反应监测质谱模式；

所述流动相的流速为0.3~0.4 mL/min；所述色谱柱的柱温为40 ℃；

所述液相色谱串联质谱分析的质谱条件包括：检测方式为电喷雾离子源负离子模式，喷雾电压为-4500 V，离子源温度为500 ℃，气帘气压力为40 psi，鞘气压力为50 psi，辅助气压力为50 psi。