[发明专利]检测1p/19q杂合性缺失的引物组、试剂盒及方法

说明书

本发明涉及诊断学领域，具体而言，涉及一种检测1p/19q杂合性缺失的引物组、试剂盒及方法。该引物组包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1～45所示的上游引物，以及与其依次对应的核苷酸序列如SEQ ID NO：46～90所示的下游引物。本发明所提供的引物组可以在一个扩增体系下进行扩增，特异性好，灵敏度高；能够简便、快速、准确地对脑胶质瘤进行检测，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及诊断学领域，具体而言，涉及一种检测1p/19q杂合性缺失的引物组、试剂盒及方法。

背景技术

脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、最常见的原发性颅脑肿瘤。年发病率约为3-8人/10万人口。脑胶质瘤(脑胶质细胞瘤)约占颅内肿瘤的46％。脑肿瘤中胶质细胞瘤发病率最高，综合发病年龄高峰在30-40岁，或10-20岁。大脑半球发生的胶质瘤约占全部胶质瘤的51.4％，以星形细胞瘤为最多，其次是胶质细胞瘤和少枝胶质细胞瘤，脑室系统也是胶质瘤较多的发生部位，占胶质瘤总数的23.9％，主要为管膜瘤，髓母细胞瘤，星形细胞瘤，小脑胶质瘤占胶质瘤总数的13％，主要为星形细胞瘤。脑胶质瘤由成胶质细胞衍化而来，具有发病率高、复发率高、死亡率高以及治愈率低的特点。

目前对于胶质瘤的治疗，包括手术、放疗、化疗、靶向治疗等手段。手术往往是胶质瘤治疗的第一步。手术不仅可以提供最终的病理诊断，而且可以迅速去除大部分的肿瘤细胞，缓解患者症状，并为下一步的其他治疗提供便利。在接受外科手术治疗后，对于高级别胶质瘤患者，往往需要进一步的放疗。对于低级别胶质瘤患者，若存在高危因素(例如肿瘤体积超过6厘米、手术切除不完全等因素)，也要考虑进行放疗。化疗及靶向治疗在胶质瘤的治疗中，逐渐发挥重要作用。对于高级别胶质瘤，替莫唑胺的应用，可以显著延长患者的生存预后。目前，替莫唑胺是治疗胶质瘤唯一有明确疗效的化疗药物。对于初治高级别胶质瘤患者，替莫唑胺在与放疗同时应用后(同步放化疗阶段)，还应继续单独服用一段时间(6-12周期)。其他的化疗药物(如尼莫司丁)，对于复发胶质瘤的治疗，可能有一定疗效。新近出现的血管靶向药物，阿伐斯丁，对于复发高级别胶质瘤，有明确疗效，可以显著延长患者的生存期。最近大规模三期研究的中期分析表明，对于初治高级别胶质瘤患者，阿伐斯丁与放疗、替莫唑胺的联用，可以显著提高患者的无进展生存期，并有望成为标准治疗方案之一。

脑胶质瘤的分子病理研究取得了重大进展，已发现了一系列有助于脑胶质瘤临床诊断子标志物，例如1p/19q杂合性缺失突变(loss ofheterozygosity，LOH)。染色体1p/19q杂合性缺失是指肿瘤细胞中一条1号染色体短臂或/和一条19号染色体长臂发生缺失。目前认为1p/19q杂合性缺失是少突胶质细胞瘤的分子特征，是其诊断性分子标志物。通常对疑似少突胶质细胞瘤或混合性少突星形细胞瘤均应进行1p/19q杂合性缺失的检测，从而协助组织学的诊断。存在1p/19q杂合性缺失的少突胶质细胞瘤生长速度较慢，并对化疗敏感。

目前临床上对于脑胶质瘤患者1p/19q杂合性缺失，常用的检测方法主要有荧光原位杂交(FISH)、基于杂合性缺失分析的聚合酶链式反应(PCR-LOH)、阵列比较基因组杂交(CGH)。FISH技术可通过荧光信号直接显示1p/19q的状态，但是探针结合区域的局限性使得小范围的缺失检出率低，而且整个操作流程比较复杂，对操作和结果分析人员的经验要求高，同时检测周期长、配套仪器和试剂价格昂贵。PCR-LOH对1p和19q上的多个微卫星区域进行扩增，再通过变性聚丙烯酰胺电泳方法来检测扩增产物，整个实验流程操作复杂、结果分析掺杂因素多且容易发生污染，不利于临床使用。CGH方法需使用进口的基因芯片，配套的仪器和试剂耗材成本较高。因此，目前对于胶质细胞瘤患者的1p/19q杂合性缺失，缺乏一种操作简便、快速、准确、价格便宜的检测方法。

发明内容

本发明的第一方面涉及一种引物组，其包括核苷酸序列如SEQ ID NO：1～45所示的上游引物，以及与其依次对应的核苷酸序列如SEQ ID NO：46～90所示的下游引物。

本发明的第二方面涉及一种接头引物组，其由如上所述的上游引物以及下游引物分别添加接头片段得到。