[发明专利]一种TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合及其应用、试剂盒和方法

说明书

本发明提供了TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合及其应用、试剂盒和方法，属于基因工程技术领域，所述引物探针组合包括扩增TFPI2基因和ACTB基因的引物探针；所述TFPI2基因的引物探针包括T2‑F、T2‑R和T2‑P，核苷酸序列依次如SEQ ID No.1～3所示；所述ACTB基因的引物探针包括AB‑F、AB‑R和AB‑P，核苷酸序列依次如SEQ ID No.4～6所示。采用本发明提供的TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合能够实现对TFPI2基因甲基化定量检测。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，尤其涉及一种TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合及其应用、试剂盒和方法。

背景技术

结直肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，根据国家癌症中心2018年报道，结直肠癌是男性第三位和女性第二位常见的恶性肿瘤，死亡病例在全世界男性、女性中分别排名第四和第三位。发达国家中结直肠癌发病率明显高于发展中国家，这与发达国家较高的肥胖率、不健康的饮食习惯等因素有关。

大规模人群筛查是降低结直肠癌发病率与死亡率的重要途径，传统结直肠癌筛查存在敏感性差，患者接受度低等问题；新筛查方法(如血液，粪便DNA检测)存在价格昂贵，患者认可度低等问题。

DNA甲基化(DNA methylation)为DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。所谓DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。近年来的大量研究表明，DNA异常甲基化与肿瘤的发生、发展、细胞癌变有着密切的联系。DNA甲基化生物学效应作为肿瘤发生发展的早期标志物，在组织病理水平可以更好的标记现阶段组织癌变程度并预测组织癌变风险。但是现有技术中对甲基化的检测局限于定性检测，还未有关于如何设计引物探针，实现TFPI2基因甲基化定量检测。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合及其应用、试剂盒和方法，采用本发明提供的TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合能够实现对TFPI2基因甲基化定量检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种TFPI2基因甲基化定量检测的引物探针组合，包括扩增TFPI2基因和ACTB基因的引物探针；

所述TFPI2基因的引物探针包括T2-F、T2-R和T2-P，所述T2-F的核苷酸序列如SEQID No.1所示，所述T2-R的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述T2-P的核苷酸序列如SEQID No.3所示；

所述ACTB基因的引物探针包括AB-F、AB-R和AB-P，所述AB-F的核苷酸序列如SEQID No.4所示，所述AB-R的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述AB-P的核苷酸序列如SEQID No.6所示。

优选的，所述T2-P的5`端添加6-FAM，3`端添加BHQ1；

所述AB-P的5`端添加ROX，3`端添加BHQ2。

优选的，所述TFPI2基因的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述ACTB基因的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示。

本发明还提供了一种TFPI2基因甲基化定量检测的试剂盒，包括定量PCR反应液、Taq酶、阳性校准品、阳性对照和阴性对照；所述定量PCR反应液中含有上述技术方案所述的引物探针组合。