[发明专利]一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物和试剂盒以及应用

说明书

本发明提供了一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物和试剂盒以及应用，属于生物技术领域。本发明的目的是解决提高检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的准确性、速度、灵敏性和稳定性的技术问题。本发明提供了一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物，所述引物组合物由以下序列组成：FIP引物、BIP引物、F3引物和B3引物，检测的步骤为提取检测样本的RNA，然后进行RT‑LAMP反应，本发明建立的RT‑LAMP检测方法可以用于临床样本的检测，且较普通RT‑PCR更加快速和简便，比RT‑PCR方法的灵敏性高10³倍。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物和试剂盒以及应用。

背景技术

2017年中国南方首次出现并报道猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine acutediarrhea syndrome coronavirus，SADS-CoV)，可引起新生仔猪严重的急性腹泻，呕吐和脱水，最终因体重急剧减轻而导致死亡。5日龄以内的仔猪病死率可达到90％以上，成年母猪感染后临床症状较轻微，且后期可逐渐恢复。组织病理学检查可观察到小肠绒毛严重的萎缩和脱落。经研究发现，该病毒的基因组结构与蝙蝠冠状病毒HKU-2的基因组结构相似，主要包括开放阅读框ORF1a/1b，结构蛋白S、E、M、N以及非结构蛋白等。SADS-CoV的临床症状与PEDV，TGEV，PDCoV等引起的临床症状极为相似，目前仅能通过实验室检测方法才能鉴定，包括病毒分离，间接ELISA和荧光定量RT-PCR等，因此建立一种高效灵敏快速的检测方法对SADS-CoV感染的防控具有重要意义。对SADS-CoV的诊断主要有病毒分离、免疫组化、免疫荧光或RT-PCR方法，但这些诊断方法不仅存在耗时长、成本高，对设备要求高等缺点，且不便于猪场临床的快速确诊和应用。因此，亟需建立现场快速诊断的方法。

发明内容

本发明的目的是为了建立快速有效的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的方法，为了解决如何提高检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的准确性、速度、灵敏性和稳定性的技术问题，本发名提供了一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物，所述引物组合物由以下序列组成：FIP引物、BIP引物、F3引物和B3引物；所述FIP引物序列为5’-CGACCCAATGCACACCCTGAATTTGGTACTGGTCCTCACGC-3’，所述BIP引物序列为5’-AACTAGCCCCACAGGTCTTGGTCCCAAACTGAGGTGTAGCAG-3’，所述F3引物序列为5’-CAGCCTTCTAACTGGCACTT-3’，所述B3引物序列为5’-ACAGTCAGGTCTGGTGGTAA-3’。

本发明还提供了上述的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物在制备猪急性腹泻综合征冠状病毒检测产品中的应用。

本发明还提供了一种检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的试剂盒，所述试剂盒包括上述的检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的引物组合物。

进一步地限定，所述引物组合物中FIP引物和BIP引物的浓度均为1.4μM，所述引物组合物中F3引物和B3引物的浓度均为0.2μM。

进一步地限定，所述试剂盒还包括阴性制品、阳性制品、反应液和SYBR Green I荧光染料；所述阴性制品为水；所述阳性制品为猪急性腹泻综合征冠状病毒的RNA。

进一步地限定，所述反应液为WarmStart LAMP 2×Master Mix。

本发明还提供了上述检测猪急性腹泻综合征冠状病毒的试剂盒在制备猪急性腹泻综合征冠状病毒检测产品中的应用。