[发明专利]一种用于检测JAK2基因的引物组合物和探针、试剂盒以及方法

权利要求书

1.一种用于检测JAK2基因的引物组合物和探针，其特征在于，所述用于检测JAK2基因的引物组合物包括用于检测突变型基因的引物对，以及用于检测野生型基因的引物对；所述用于检测突变型基因的引物对含有Seq ID No.1所示序列的上游引物和Seq ID No.2所示序列的下游引物；所述用于检测野生型基因的引物对含有Seq ID No.1所示序列的上游引物和Seq ID No.3所示序列的下游引物；所述用于检测JAK2基因的探针为Seq ID No.4所示序列；

Seq ID No.1：5’- M-TGTGATCCTGAAACTGAATTT -3’

Seq ID No.2：5’- M-TGGTTTTAAATTATGGAGTATGTG -3’

Seq ID No.3：5’- M-TGGTTTTAAATTATGGAGTATGTT -3’

Seq ID No.4：5’- TGTGGAGACGAGAGTAAGTAAAACTACAGG -3’；

其中，各引物5’端的M为不与JAK2基因互补的核酸序列，用于增加各引物的GC含量；所述探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光猝灭基团；

所述M为CGCG。

2.一种用于检测JAK2基因的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的引物组合物和探针。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括质控品，所述质控品含有野生型基因组DNA和突变型基因组DNA。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述质控品含有浓度为3×10³copies/µL野生型基因组DNA和浓度为3×10³ copies/µL突变型基因组DNA。

5.根据权利要求3所述的试剂盒，所述试剂盒包括内参引物对和内参探针，所述内参引物对含有Seq ID No.5所示序列的上游引物和Seq ID No.6所示序列的下游引物，所述内参探针为Seq ID No.7所示序列；

Seq ID No.5：5’- CACTGGGTCCAGCGAGAAG -3’

Seq ID No.6：5’- TCTTCCAGAAGCCCTTCAGC -3’

Seq ID No.7：5’- CCAGTAGCATCTGACTTTGAGCCTCAGGGT -3’；

所述内参探针的5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光猝灭基团，所述内参探针和所述用于检测JAK2基因的探针5’端标记的荧光报告基团不同。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，用于检测JAK2基因的内标探针的5’端采用HEX荧光基团修饰，3’端采用BHQ1荧光淬灭基团修饰；用于检测JAK2基因的探针的5’端采用FAM荧光基团修饰，3’端采用BHQ1荧光淬灭基团修饰。

7.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括定量标准品，所述定量标准品含有野生型质粒和突变型质粒。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述定量标准品含有浓度为1×10¹copies/µL、1×10²copies/µL、1×10³ copies/µL、1×10⁴ copies/µL野生型质粒和浓度为1×10¹ copies/µL、1×10²copies/µL、1×10³ copies/µL、1×10⁴ copies/µL突变型质粒。

9.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括用于实时荧光PCR反应的试剂。

10.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的PCR扩增程序为：95℃预变性10分钟，然后进入45个循环：94℃变性15秒、60℃退火与延伸60秒，在退火与延伸时进行荧光收集。