[发明专利]肝癌早期的预警方法、及预警用检测试剂盒、检测方法

说明书

本发明公开了肝癌早期的预警方法、及预警用检测试剂盒、检测方法，属于生物技术领域。本发明的预警方法包括通过PCR法检测外周血样本中RASSF1A、ELF、p16和GSTP1基因的DNA甲基化水平，计算罹患肝癌的风险值，根据计算结果预警；计算公式为：Y＝1.208163‑0.00653×Ct(RASSF1A)‑0.00751×Ct(ELF)‑0.00555×Ct(p16)‑0.00457×Ct(GSTP1)；Y≥0.3177，判断为高风险，Y0.3177，判断为低风险。本发明的肝癌早期预警用多基因甲基化联合检测试剂盒，包括特异性检测外周血样本中RASSF1A、ELF、p16和GSTP1基因的DNA甲基化检测试剂，以及内源性基因和内源性基因检测试剂。本发明的高风险预警结果与临床诊断结果符合度高，对于早期肝癌的诊断具有很好的应用前景，增加肝癌患者的生存率、治愈率。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及肝癌早期的预警方法、及预警用检测试剂盒、检测方法。

背景技术

肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)是一种高死亡率的原发性肝癌，它是全球范围最常见的恶性肿瘤之一，尤其是在亚洲、非洲和南部欧洲。全球范围内，每年有数十万人死于肝癌。世界卫生组织(WHO)明确指出：癌症患者如果能早期发现，治愈率可达到80％。因此肝癌的早期诊断对肝癌病人治疗效果及生存质量有极为重大的意义。

现有技术中，肝癌的早期筛查和诊断方法主要分为影像学检查和生化检测。其中，以肿瘤标志物甲胎蛋白(alpha-fetoprotein，AFP)检测为主的生化检测，由于生理因素影响及个体差异，其灵敏度和特异性远远不能满足临床诊断需求，并且组织活检具有一定的创伤性，患者接受度低。而以PET-CT为主的影像学检查对人体有射线辐射伤害，且费用昂贵，易受到检查者经验、手法、细致程度等主观因素的影响。因此，现有技术在肝癌的早期预测和诊断中效果均较差，仍然急需建立一种经济、快速、有效的肝癌早期筛查方法。

相比于影像学检查和生化检测方法，以基因为靶标的分子检测方法已被证实拥有更高的灵敏度和特异性。研究表明，肝癌组织中存在多种基因启动子异常甲基化现象，这些基因启动子区域DNA甲基化紊乱直接影响细胞周期和信号传导途径，与肝癌的发生发展息息相关。循环肿瘤DNA(Circulating Tumor DNA,ctDNA)携带有与原发肝癌组织一致的分子遗传学改变，可以在外周血样本中获得。从临床角度出发，外周血样本较易获得、分子诊断灵敏度和特异性高。外周血循环肿瘤DNA甲基化程度分析，可为肝癌的早期筛查提供重要信息；同时，联合检测多个基因的异常甲基化水平，有利于提高肝癌早期预警的准确率，对于肝癌早期诊断、治疗有着重大意义。因此，提供一种方法，能根据外周血循环多个基因的甲基化水平进行肝癌早期预警，成本低廉、特异性好、灵敏度高，操作简单方便，成为了本领域技术人员亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的之一在于，提供一种肝癌早期的预警方法，解决现有技术中肝癌的早期筛查和预警灵敏度和特异性不好，成本高昂的问题。

本发明的目的之二在于，提供肝癌早期预警用多基因甲基化联合检测试剂盒。

本发明的目的之三在于，提供采用该多基因甲基化联合检测试剂盒检测外周血样本中RASSF1A、ELF、p16和GSTP1基因的DNA甲基化水平的方法。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明所述的一种肝癌早期的预警方法，通过PCR法检测外周血样本中RASSF1A、ELF、p16和GSTP1基因的DNA甲基化水平，计算罹患肝癌的风险值，并根据计算结果进行预警；计算公式为：

Y＝1.208163-0.00653×Ct(RASSF1A)-0.00751×Ct(ELF)-0.00555×Ct(p16)-0.00457×Ct(GSTP1)；