[发明专利]一种利用优化的单链核酸检测器进行核酸检测的方法在审
| 申请号： | 202011295714.1 | 申请日： | 2020-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN114517224A | 公开（公告）日： | 2022-05-20 |
| 发明（设计）人： | 段志强;陈莹 | 申请（专利权）人： | 山东舜丰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6816 | 分类号： | C12Q1/6816;C12N9/22;C12N15/113 |
| 代理公司： | 北京君慧知识产权代理事务所(普通合伙) 11716 | 代理人： | 王振南 |
| 地址： | 250201 山东省济南市高新*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 优化 核酸 检测器 进行 检测 方法 | ||
1.一种检测样品中靶核酸的方法，所述方法包括将样品与V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器接触，所述gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白选自Cas12i、Cas12j中的一种或两种组合；检测由CRISPR/CAS效应蛋白切割单链核酸检测器产生的可检测信号，从而检测靶核酸；
所述单链核酸检测器含有21-29个任意碱基，优选的21-25个任意碱基，优选的25个任意碱基。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Cas12i的氨基酸序列与SEQ ID No.1相比有80％的同源性，所述Cas12j的氨基酸序列与SEQ ID No.2相比有80％的同源性。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述可检测信号通过以下方式进行检测：基于视觉的检测，基于传感器的检测，颜色检测，基于金纳米颗粒的检测，荧光偏振，基于荧光信号的检测，胶体相变/分散，电化学检测和基于半导体的检测。
4.根据权利要求1-3任一所述方法，其特征在于，所述的单链核酸检测器的5’端和3’端分别设置不同的报告基团，或者，所述单链核酸检测器的两端分别设置不同的标记分子。
5.权利要求1-4任一方法中所述的单链核酸检测器在制备检测样品中的靶核酸的组合物、试剂或试剂盒中的用途。
6.权利要求1-4任一方法中所述的单链核酸检测器在提高核酸检测组合物、核酸检测试剂或核酸检测试剂盒的检测效率中的用途。
7.一种用于检测样品中靶核酸的组合物，其特征在于，所述组合物包括V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器；所述gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白选自Cas12i、Cas12j中的一种或两种组合，所述单链核酸检测器含有21-29个任意碱基，优选的，21-25个任意碱基，优选的，25个任意碱基。
8.一种用于检测样品中靶核酸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括V型CRISPR/CAS效应蛋白、gRNA(指导RNA)和单链核酸检测器，所述gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白选自Cas12i、Cas12j中的一种或两种组合，所述单链核酸检测器含有21-29个任意碱基，优选的，21-25个任意碱基，优选的，25个任意碱基。
9.权利要求7所述的组合物或权利要求8所述的试剂盒在核酸检测中的应用。
10.一种切割单链核酸检测器的方法，其特征在于，所述方法包括，使单链核酸检测器与靶核酸、V型CRISPR/CAS效应蛋白和gRNA(指导RNA)接触，gRNA包括与所述CRISPR/CAS效应蛋白结合的区域和与靶核酸杂交的导向序列，所述V型CRISPR/CAS效应蛋白选自Cas12i、Cas12j中的一种或两种组合，所述单链核酸为含有21-29个任意碱基的单链核酸检测器，优选的，21-25个任意碱基的单链核酸检测器，优选的，25个任意碱基的单链核酸检测器。
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