[发明专利]与肝损伤内质网应激未折叠蛋白反应相关的ERO1α的分子标志物的筛选方法及其应用

权利要求书

1.一种与肝损伤内质网应激未折叠蛋白反应相关的ERO1α的分子标志物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)构建CBS^+/-基因敲除小鼠高同型半胱氨酸血症模型，Hcy干预肝细胞体外模拟高同型半胱氨酸血症；

(2)使用自动生化仪检测CBS^+/-基因敲除小鼠高同型半胱氨酸血症模型中Hcy的水平以及AST和ALT的水平；

(3)使用透射电子显微镜检测肝脏内质网应激状态；

(4)使用不同浓度Hcy干预肝细胞后，使用流式细胞术以及MMT实验检测肝细胞凋亡以及增值状态；

(5)使用western blot和实时荧光定量PCR检测肝细胞未折叠蛋白反应和ERO1α的表达；

(6)实时荧光定量PCR以及荧光显微镜检测ERO1α siRNA和过表达腺病毒的转染效率；

(7)肝细胞转染ERO1α siRNA和过表达腺病毒后，Hcy干预肝细胞48h后，western blot检测肝细胞内质网应激未折叠蛋白分子；

(8)分析比较ERO1α在肝脏损伤中的检测灵敏性与常规肝脏损伤检测的方法比较，同时人为恢复补充ERO1α可作为肝脏损伤治疗的重要靶点。

2.根据权利要求1所述的与肝损伤内质网应激未折叠蛋白反应相关的ERO1α的分子标志物的筛选方法，其特征在于，在CBS^+/-基因敲除小鼠中，与正常组相比，HHcy肝脏组织中ERO1α的表达明显降低，在体外Hcy干预的肝细胞中得到了相同的趋势。

3.一种权利要求1所述筛选方法得到的ERO1α的分子标志物在诊断HHcy致肝损伤的试剂制备过程中的应用。