[发明专利]与小麦低多酚氧化酶活性基因QPpo-5D共分离的分子标记

权利要求书

1.AX-110939270标记的KASP引物在如下任意一项中的应用：

（1）在鉴定或辅助鉴定小麦低多酚氧化酶活性中的应用；

（2）在选育具有低多酚氧化酶活性的小麦中的应用；

所述KASP引物的序列如下：

前引物1：FAM 5’- CTCGTGAATTAGTAAACGACTATTTC -3’；

前引物2：HEX 5’- CTCGTGAATTAGTAAACGACTATTTG -3’；

后引物：5’- TGAAAGCAGATGCATCTGCCTTCTGGCTC -3’；

选择AX-110939270标记的荧光信号为HEX的品种；所述小麦为长江中下游麦区小麦。

2.一种低多酚氧化酶活性小麦的育种方法，其特征在于，采用权利要求1所述的KASP引物PCR扩增小麦叶片DNA，选择AX-110939270标记的荧光信号为HEX的品种；所述小麦为长江中下游麦区小麦。

3.根据权利要求2所述低多酚氧化酶活性小麦的育种方法，其特征在于，将所得扩增产物进行荧光信号扫描，采用Kluster Caller软件对扫描数据进行分析得到散点图，散点图中，X轴区域对应的荧光信号为FAM，Y轴区域对应的荧光信号为HEX，若扩增产物的荧光信号为FAM，表明所述小麦为CC基因型品种；若扩增产物的荧光信号为HEX，表明所述小麦为GG基因型品种。

4.根据权利要求3所述低多酚氧化酶活性小麦的育种方法，其特征在于，PCR扩增的反应体系为：

20ng/µl 的2.5 µl模板、0.07 µl KASP assay mix、2×KASP master mix 2.5 µl；所述KASP assay mix包括：每个等位基因特异性前引物各12 µl 100 µM，30 µl后引物100 µM与46 µl Tris-HCl 10 mM，pH 8.3。

5.根据权利要求2所述低多酚氧化酶活性小麦的育种方法，其特征在于，PCR反应循环程序如下：94℃预变性15 min，然后按“94℃，20s；65-57℃，60s；每个循环下降0.8℃”进行10个循环；最后按照“94℃，20s；57℃，60s”进行32个循环扩增。