[发明专利]一种靶向标记非小细胞肺癌的荧光分子探针及其应用

说明书

本发明属生物医药技术领域，为了解决目前缺少利用噬菌体展示随机肽库对NCI‑H1299细胞系的筛选，提供一种靶向标记非小细胞肺癌的荧光分子探针及其应用。所述荧光分子探针为荧光标记靶向肽，命名为FITC‑NSP1，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。该探针特异性的结合非小细胞肺癌细胞系NCI‑H1299，在体外人痰液脱落细胞中检测非小细胞肺癌中的应用。为非小细胞肺癌的分子诊断和靶向治疗提供实验基础。用Ph.D.‑C7Csupgt;TM/supgt;环七肽库在非小细胞肺癌NCI‑H1299细胞荷瘤裸属体内进行筛选并成功得到了肺癌靶向肽NSP1，又在体外和体内初步验证了其特异性及靶向性，为肺癌早期诊断的研究奠定了基础。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种靶向标记非小细胞肺癌的荧光分子探针及其应用，该荧光分子探针特异性的结合非小细胞肺癌细胞系NCI-H1299，在体外人痰液脱落细胞中检测非小细胞肺癌中的应用。为非小细胞肺癌的分子诊断和靶向治疗提供实验基础。

背景技术

肺癌是最常见的、病死率最高的恶性肿瘤之一，其发病率居各恶性肿瘤之首。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌（鳞癌）、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢，扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%，约75%的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。由于肺癌起病隐匿，早期没有特殊的临床表现，目前仍缺乏有效的早期筛查和诊断方法，因此80%以上的肺癌在确诊时已属晚期，总体5年生存率不足15%。

若肺癌患者能够早期诊断并及时进行手术治疗，其预后较中晚期肺癌将显著改善。因此早期发现、诊断和靶向治疗是提高治愈率的有效途径。目前，肺癌的早期筛查手段有胸部X线检查、低剂量螺旋CT、经胸壁穿刺活组织和支气管镜检查等，但这些检查不能及早发现肿瘤细胞在分子水平的改变。因此，发展新型诊断技术，真正实现肿瘤的早期诊断，成为现代医学研究的热点。

肿瘤特异性多肽是目前国内外研究的重点之一，可携带荧光素特异性富集在肿瘤组织、细胞，是肿瘤光学分子靶向诊断的重要载体，已广泛用于膀胱癌、胃癌、胰腺癌等多种实体瘤，而人非小细胞肺癌少有研究。

噬菌体展示技术从1985年初建立到现在，已发展成为生命科学领域的一项重要技术，由于具有库容大、高通量、操作简便等特点，已广泛应用于各个方面，成为筛选肿瘤细胞或组织的特异性结合肽的一个强大工具，因此成为目前癌症诊疗研究中最具潜力的方法之一。利用噬菌体展示技术已经筛选得到多条针对不同肺癌细胞株的靶向肽，Liang等人利用噬菌体展示七肽库筛选得到人小细胞肺癌细胞系NCI-H446的特异性结合肽AGALHQF；Pan等人利用体内噬菌体展示技术筛选得到非小细胞肺癌细胞A549的特异性结合肽zp2，该多肽能与临床人肺癌标本特异性结合；He等利用体外噬菌体展示技术筛选了肺癌H460细胞株的环七肽CSNIDARAC，活体荧光成像实验证明CSNIDARAC能选择性地结合到肿瘤组织，在正常组织中摄取量少，有望成为肺癌靶向的肿瘤显像剂；靶向性多肽是当前普遍认为的比较理想的肿瘤诊断和靶向治疗载体，它们具有高特异性、高亲和性、良好的组织渗透性，能被肿瘤细胞所摄取，易于化学合成并有较低的免疫原性等优点，同单克隆抗体相比拥有更多的优势。近年来，国内外的研究人员利用肽库技术针对不同的靶点进行不同的肿瘤靶向肽筛选，在肿瘤的诊断、靶向治疗等方面具有潜在的临床应用价值。

目前利用噬菌体展示技术针对肿瘤细胞的筛选方法包括以下3种：体外生物筛选、体内筛选、体外/体内筛选。十几年来国内外的研究人员利用噬菌体展示技术发现的特异性多肽既可作为成像剂用于肿瘤及其微转移灶的早期诊断；也可用于连接抗癌药物进行靶向治疗，而不损伤其他健康组织。

体内噬菌体展示技术不仅具备常规噬菌体肽库高通量、快速、高效的筛选特征，还因为该筛选过程在体内进行，能充分模拟人体内环境，最大程度地保持肿瘤组织和细胞表面各种配体的天然构象。在筛选过程中，由于动物体内有各种正常组织作为背景对照，可以使噬菌体随机肽库经过层层筛选，以最大可能性获得具备较高亲和力和特异性的短肽。