[发明专利]一种外显子连接蛋白、核酸分子、表达载体、重组蛋白表达系统、应用

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种外显子连接蛋白、核酸分子、表达载体、重组蛋白表达系统、应用。本发明公开了一种具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的外显子连接蛋白，通过构建含有外显子连接蛋白基因序列的重组蛋白表达系统，将外显子连接蛋白应用于重组蛋白的表达，同等条件下，与不含外显子连接蛋白的细胞系进行比较，能够显著提高重组蛋白的表达量，表达水平提高6～11倍多，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种外显子连接蛋白、核酸分子、表达载体、重组蛋白表达系统、应用。

背景技术

近年来，生物医药产业已经成为了21世纪创新最为活跃、发展最为迅猛、前景最为光明、影响最为深远的新兴产业。利用外源蛋白表达系统生产具有重要价值的药用蛋白是现代生物技术产业的核心技术和研究热点。哺乳动物细胞生产的重组蛋白质能够进行正确折叠、装配和翻译后修饰，具有与人源蛋白分子结构更为接近的优势，因此哺乳动物细胞已经成为蛋白药物的主要表达宿主。目前近80％批准上市的重组蛋白药物均来自于哺乳动物细胞，其中应用最广泛的是人胚胎肾细胞293(human embryonic kidney cells 293)细胞和中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells，CHO)。但与大肠杆菌等表达系统相比，哺乳动物细胞的表达水平仍较低、获得高表达工程细胞株所需的时间长、细胞大规模培养的成本高等导致哺乳动物细胞生产蛋白质类药物的成本较高。这就需要改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本的同时确保产品的质量和安全。

目前，常用的提高哺乳动物细胞重组蛋白表达水平的策略主要为表达载体的优化、细胞系的改造、培养基及培养工艺的优化(如申请公布号为201910012271.1的中国专利申请文件中公开了一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法；申请公布号为201711321218.7的中国专利申请文件中公开了一种CHO细胞无血清培养基；申请公布号为201911425714.6的中国专利申请文件中公开了一种稳定表达GPC3的重组CHO细胞株及其应用)。在哺乳动物细胞中，新合成的转录初始物(mRNA前体)要经过细胞核内多步骤加工才能成为成熟mRNA模板用于蛋白质合成。其中，mRNA前体的剪接(splicing)对于基因表达至关重要，因为它不仅可以去除内含子，同时可以赋予mRNAs参与3'-端加工，mRNA的输出、定位和翻译等蛋白质翻译的下游步骤。由于剪接和翻译是时间和空间分离发生的事件，剪接过程有外显子连接复合体(Exon-junction complex，EJC)蛋白质参与(Leung CS,Johnson TL.The Exon Junction Complex:A MultitaskingGuardian of the Transcriptome.Mol Cell.2018；72(5):799-801.Gerbracht JV,Gehring NH.The exon junction complex:structural insights into a faithfulcompanion of mammalian mRNPs.Biochem Soc Trans.2018；46(1):153-161)，这些因子通过转运到细胞质而与RNA结合。有些EJC蛋白能够增强剪接mRNA的翻译能力，进而增强蛋白质的表达。因此，研究发现能够应用于提高重组蛋白表达的外显子连接点复合体，对重组蛋白类的生物制剂的发展具有重要的意义。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的之一在于提供一种外显子连接蛋白，该连接蛋白能用于提高哺乳动物细胞重组蛋白表达水平。

本发明的目的之二在于提供一种核酸分子，编码本发明外显子连接蛋白。

本发明的目的之三在于提供一种外显子连接蛋白表达载体，包含本发明核酸分子，用于表达本发明外显子连接蛋白。

本发明的目的之四在于提供一种重组蛋白表达系统，包含本发明表达载体，提高目的蛋白表达水平。