[发明专利]肝癌类器官及其培养方法、培养用培养基和用途

权利要求书

1.一种培养肝癌类器官的方法，其特征在于，该方法包括：

将肝癌组织细胞与培养基和基质胶混合，得到待培养物，其中，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为5～10ng/ml；

所述肝癌组织细胞由肝癌组织经酶解处理得到；

对所述待培养物进行培养扩增，得到肝癌类器官；

所述培养基中还含有高级 DMEM/F 12培养基、谷氨酰胺、青链霉素、HEPES、B27 补充剂、N2 补充剂、N-乙酰半胱氨酸、重组人-胃泌素I、重组人FGF10、毛喉素和A83-01；

以所述培养基为基准，所述谷氨酰胺的含量为0.1～10体积%，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27补充剂的含量为1～10体积%，所述N2补充剂的含量为0.1～5体积%，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为0.1～5mM，所述重组人-胃泌素I的浓度为1～50nM，所述重组人FGF10的浓度为50～200ng/ml，所述毛喉素的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述高级DMEM/F 12培养基。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待培养物中，所述肝癌组织细胞的浓度为1×10⁴～5×10⁴个/mL，所述基质胶的含量为2～15体积%。

3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述酶解处理包括：

将所述肝癌组织与酶解液混合，得到待酶解物；

将所述待酶解物进行培养酶解2～12h，得到酶解产物；

对所述酶解产物进行分离处理，得到所述肝癌组织细胞。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述酶解液中含有DMEM/F 12培养基、HEPES、青链霉素、谷氨酰胺和胶原酶，以所述酶解液为基准，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述谷氨酰胺的含量为0.1～10体积%，所述胶原酶的含量为1～5ng/ml。

5.一种用于肝癌类器官培养的培养基，其特征在于，所述培养基中含有胰岛素生长因子-2，以所述培养基为基准，所述胰岛素生长因子-2的浓度为5～10ng/ml；

所述培养基中还含有高级 DMEM/F 12培养基、谷氨酰胺、青链霉素、HEPES、B27 补充剂、N2 补充剂、N-乙酰半胱氨酸、重组人-胃泌素I、重组人 FGF10、毛喉素和A83-01；其中，

以所述培养基为基准，所述谷氨酰胺的含量为0.1～10体积%，所述青链霉素的浓度为50～200μg/ml，所述HEPES的浓度为5～25mM，所述B27补充剂的含量为1～10体积%，所述N2补充剂的含量为0.1～5体积%，所述N-乙酰半胱氨酸的浓度为0.1～5mM，所述重组人-胃泌素I的浓度为1～50nM，所述重组人FGF10的浓度为50～200ng/ml，所述毛喉素的浓度为1～20μM，所述A83-01的浓度为1～10μM，余量为所述高级DMEM/F 12培养基。