[发明专利]一种绿原酸人工抗原及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种绿原酸人工抗原，其特征在于结构如下：其制备方法如下：

技术领域

本发明属于生物医疗领域，具体涉及一种绿原酸人工抗原的制备方法和应用。

背景技术

绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)，分子量为354.31，CAS号为327-97-9，其结构式为：

绿原酸是由咖啡酸(Caffeic acid)与奎尼酸(Quinic 1-羟基六氢没食子酸)生成的缩酚酸，是植物在有氧呼吸过程中产生的一种苯丙素类化合物，广泛存在于杜仲科、忍冬科忍冬属和菊科嵩属植物中，是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、增高白血球、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基和兴奋中枢神经系统等作用。现代科学对绿原酸生物活性的研究已深入到食品、保健、医药和日用化工等多个领域。因此，寻找合适的绿原酸含量测定方法，成为这类中药材研究的重要环节。

目前，国内外关于绿原酸的检测方法主要有：紫外分光光度法、高效液相色谱法、气相色谱法等。这些传统的仪器分析方法具有检测结果准确、稳定、可靠等优点，但其需要昂贵的仪器、复杂的操作和复杂的样品前处理，不适用于大量样品的快速检测。而免疫分析法具有简便、快速、灵敏、特异性好等优点，这对绿原酸检测具有重要的意义。为建立绿原酸快速免疫分析方法，有必要提供一种绿原酸人工抗原及其制备方法。

CN105237633公开了一种绿原酸完全抗原及其制备方法和应用，但是其所制备的抗原免疫动物后的抗血清效价有待提高，且用于免疫检测的灵敏度未知。

因此，本申请开发出了一种新型的绿原酸人工抗原及其制备方法，该制备方法过程简便，且免疫动物可产生高效价的抗体，能用于绿原酸快速检测，提高绿原酸检测的灵敏度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种灵敏度高，且制备方法简单，能用于绿原酸快速检测的绿原酸人工抗原及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明提供以下的技术方案：

一种绿原酸人工抗原，其结构如下：

一种绿原酸人工抗原合成的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)称取牛血清白蛋白或卵清蛋白30mg和6-氨基己酸6mg，加入2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)溶液8mL溶解，再加入EDAC为25mg，室温持续搅拌反应12h；

(2)反应完成后，将反应液置于透析袋中，在4℃以PBS透析72h，获得氨基化的载体蛋白溶液；

(3)称取绿原酸为10mg，加DMF为0.5mL溶解，再加入NHS为15mg、EDAC为16mg，16℃搅拌过夜，即持续搅拌12h，制成绿原酸活化中间产物；

(4)次日，在磁力搅拌器上边搅拌边将绿原酸活化中间产物逐滴加入到氨基化的载体蛋白溶液中，搅拌过夜反应，即持续搅拌12h；

(5)次日将搅拌过夜的反应液置于处理过的透析袋中，在4℃冰箱内以0.01M的PBS(pH＝7.4)中透析72h，每8h换透析液一次；

(6)透析结束后，将透析袋内液体离心，去沉淀，即得绿原酸人工抗原。

一种利用绿原酸人工抗原制备绿原酸抗体的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)绿原酸人工抗原合成，其中，免疫抗原采用绿原酸和牛血清白蛋白合成，检测抗原采用绿原酸和卵清白蛋白合成，即所述绿原酸人工抗原通过上述方法制备得到；