[发明专利]一种具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽及其制备方法与应用

说明书

本发明公开了一种具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽及其制备方法与应用。本发明的环十六肽包含16个氨基酸残基，分子量为1735.02Da，其氨基酸序列为：LVYPFPGPIPNSLPQN，其中N端亮氨酸的氨基和C端天冬酰胺的羧基以肽键的形式连接形成环状骨架。所述的环十六肽对应的线形肽来源于食用乳酸菌发酵牛奶中的β‑酪蛋白，所述的环十六肽可通过介导环肽合成的酶催化制备得到。本发明的环十六肽具有很强的ACE抑制活性，对ACE的半抑制浓度IC₅₀为52.9μmol/L；具有较好的抗消化稳定性；且对细胞增殖影响小，细胞毒性低，安全性高；可用于降血压功能食品或药品的开发与制备，具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于功能食品及生物医药领域，特别涉及一种具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽及其制备方法与应用。

背景技术

高血压是世界上死亡率最高的疾病之一，引起人们的广泛关注。在调节人体血压的众多因素中，血管紧张素转移酶(angiotensin-converting enzyme,ACE)是影响升压、降压两个系统平衡的主要因素，因此成为治疗高血压、心力衰竭等疾病的理想靶点。对ACE活性进行抑制，可以有效降低人体血压。

人工合成的降血压药物，具有良好的降血压效果，然而其缺点和副作用也不容忽视。如稳定性差，停药后易反弹，引起咳嗽、过敏及血压过低等症状。因此，研发获得具有降压效果更好、稳定性更强的ACE抑制剂，对于高血压疾病的预防和治疗有着迫切的需求。

环肽是指以氨基酸肽键形成的具有环状骨架的多肽类化合物，刚性的环状结构对其内在构象具有一定的约束作用。一般地，环肽的热稳定性、结构稳定性、抗水解能力和生物利用度等比线性多肽更加优越。目前，已发掘很多具有ACE抑制活性的线性多肽化合物，但是，有关ACE活性的环肽则鲜见报道。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种具有血管紧张素转换酶(ACE)抑制活性的环十六肽。所述的环十六肽可以通过介导环肽合成的酶催化底物十八肽(氨基酸序列为LVYPFPGPIPNSLPQNHV)环化得到，研究发现其对ACE具有很强的抑制活性。所述的环化的形式为，底物十八肽C端的组氨酸-缬氨酸(HV)序列断裂，然后N端和C端首尾以肽键相连即得到环十六肽。

所述的底物十八肽是通过在十六肽(氨基酸序列为LVYPFPGPIPNSLPQN)C端添加组氨酸-缬氨酸(HV)序列得到。所述的十六肽是乳酸菌(Lb.jensenii ATCC 25258)发酵牛奶中β-酪蛋白的11-26片段多肽。

所述的环十六肽是所述的十六肽的环状形式。研究发现所述的环十六肽比所述的十六肽，具有更强的ACE抑制活性和更高的抗消化稳定性。

本发明的另一目的在于提供所述的环十六肽的应用。

本发明的再一目的在于提供一种降血压功能食品、ACE抑制剂或降血压药物。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽，其氨基酸序列为亮氨酸-缬氨酸-酪氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-脯氨酸-甘氨酸-脯氨酸-异亮氨酸-脯氨酸-天冬酰胺-丝氨酸-亮氨酸-脯氨酸-谷氨酰胺-天冬酰胺(LVYPFPGPIPNSLPQN，SEQ ID NO.1)，其中N端亮氨酸的氨基和C端天冬酰胺的羧基以肽键的形式连接，使得多肽形成环状。

上述具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽的制备方法，包括以下步骤：

S1、根据介导环肽合成的酶的识别特性，设计并合成所述的环十六肽对应的底物；

S2、将所得底物以及介导环肽合成的酶加入到反应缓冲液中，进行反应，得到反应液；

S3、将所得反应液进行纯化，即获得所述的具有血管紧张素转换酶抑制活性的环十六肽。