[发明专利]一种基于无核酸提取的文库构建检测结直肠癌标志物的试剂盒、方法及其应用

说明书

本发明提供了一种基于无核酸提取的文库构建检测结直肠癌标志物的试剂盒、方法及其应用，所述试剂盒包括结直肠癌分子标志物的引物组合物，所述引物组合物包括AKT1基因的引物对、BRAF基因的引物对、KRAS基因的引物对、NRAS基因的引物对、PIK3CA基因的引物对、PTEN基因的引物对和SMAD4基因的引物对，文库构建方法基于多重PCR，针对结直肠癌患者进行特定肿瘤细胞定位后，实现了无需核酸抽提而直接进行扩增的技术效果。

技术领域

本发明属于高通量测序技术领域，涉及一种基于无核酸提取的文库构建检测结直肠癌标志物的试剂盒、方法及其应用。

背景技术

结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是人类高发恶性肿瘤，结肠癌的发生与饮食、环境和遗传等因素密切相关，是多种癌基因协同作用的结果。结直肠癌的形态大体分为三种：息肉样型、狭窄型和溃疡型，各型癌肿的好发部位和临床表现也不相同。息肉样型大肠癌好发于盲肠和升结肠等右半结肠，癌体较大，外形似菜花样，向肠腔突出，表面容易溃烂、出血、坏死。狭窄型大肠癌好发于直肠、乙状结肠和降结肠等左半结肠，癌体不大，但质地硬，常围绕肠壁浸润而导致肠腔呈环型狭窄，容易引起肠梗阻。溃疡型大肠癌好发于左半结肠，癌体较小，早期形成凹陷性溃疡，容易引起出血、穿透肠壁侵入邻近器官和组织。

目前，结直肠癌的诊断和治疗主要依据病理活检报告。活检诊断为浸润性癌的病例接受规范性结直肠癌治疗。然而由于活检取材的限制，活检病理不能确定是否发生黏膜下浸润，诊断为高级别上皮内瘤变的病例，临床医师需要综合其他临床信息确定治疗方案。低位直肠肿瘤涉及是否保肛决策时，需要确认活检组织有无达到“癌变”程度，目前主要通过检测肿瘤组织K-ras及N-ras基因、BRAF基因、错配修复蛋白表达或微卫星状态及其他相关基因状态确定是否发生复发或转移性结直肠癌。但是直肠癌很容易误诊，据有关资料统计，直肠癌的误诊率为30％，主要是对30岁以下的直肠癌病人警惕性不够，仅限于部分检查结果，或检查到“痔”就不再作进一步检查，对直肠内发生的癌前病变，如息肉、溃疡等未能及时治疗，而发展成癌症。直肠指诊初步诊断是早期发现直肠癌最重要的方法，80％以上的直肠癌可以在直肠指诊时触及。

目前，肠癌的根治性治疗方法首推外科手术，但是大肠癌的手术治愈率、5年生存率始终徘徊在50％左右，治疗失败的主要原因在于局部复发率较高，因此有必要采用综合治疗方法提高大肠癌的治疗效果。目前研究较多、效果较好的是外科和放射综合疗法，包括术前放射、术中放射、术后放射、“三明治”放疗等，各种不同的综合治疗方法有不同的特点。对于晚期直肠癌患者，尤其是局部肿瘤浸润到附近组织(直肠旁、直肠前组织、腹腔淋巴结、膀胱、尿道、耻骨支)以及有外科禁忌证的患者，主要采用姑息性放射法。对于不适合放化疗的患者，主要在多学科讨论下决定是否进行单纯的新辅助化疗。