[发明专利]一种丙环唑半抗原、完全抗原和其抗体及其制备和应用

说明书

本发明公开了一种丙环唑半抗原、完全抗原和其抗体及其制备和应用。本发明首先制备得到了一种丙环唑半抗原，应用该半抗原制备得到了丙环唑完全抗原和多克隆抗体，该抗体对丙环唑具有高灵敏度和高特异性的识别能力，半抑制浓度为4.23ng/mL，定量检测范围为0.29～61.83ng/mL，检测限为0.06ng/mL，对乙环唑、三唑醇和己唑醇等类似物交叉反应率均低于1％，为建立特异性丙环唑的免疫检测方法提供了核心原材料；此外，利用该多克隆抗体建立了检测丙环唑残留的酶联免疫试剂盒和胶体金试纸条，具有特异性高、灵敏度高、精确度高、准确度高等特点，能够特异性的检测样品中的丙环唑残留。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域。更具体地，涉及一种丙环唑半抗原、完全抗原和其抗体及其制备和应用。

背景技术

丙环唑是一种既有保护作用又有治疗作用的内吸性三唑类杀菌剂，可被根茎叶部吸收，并很快地在植物体内向上传导。其作用机理是影响甾醇的生物合成，使病原菌的细胞膜功能受到破坏，最终导致细胞死亡，从而起到杀菌、防病和治病的功效。经查询中国农药信息网，丙环唑在我国登记的作物主要有水稻、小麦、玉米、大豆、油菜、马铃薯、茭白、莲藕、枇杷、花生、苹果、香蕉、榛子和人参等。残效期在1个月左右，一般只对皮肤和眼有刺激作用，经口误服，可引起恶心、呕吐等。由于其毒负作用，国内国际上均对其残留限量做出了限定。目前欧盟等国家对不同作物中的丙环唑残留量做出了详细的限量，日本肯定列表中规定丙环唑在菜心、芥蓝和小白菜上的最大允许残留限量(MRL值)为0.05mg/kg。中国在GB2763-2016《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中规定各类食品中最大允许残留限量(MRL值)为0.02mg/kg。因此，为了公众的健康，对食品中丙环唑残留量的检测是十分必要的。

有关丙环唑在蔬菜、水果、粮食、食品中的残留分析方法国内外已有一些报道。目前，对于丙环唑残留的检测方法主要有高效液相色谱(High Performance LiquidChromatography，HPLC)、气相色谱(Gas Chromatography，GC)、气相色谱-质谱联用(GasChromatography-Mass Spectrometer，GC-MS)以及高效液相-质谱联用(High PerformanceLiquid Chromatography-Mass Spectrometer，HPLC-MS)等方法。这些方法结果可靠，灵敏度高，已有相关的技术标准可供参考。但由于需要昂贵的仪器、专门的操作人员，以及样品前处理复杂、有机溶剂使用量大等，因此该方法一方面不能实现现场的快速检测；另一方面也很难在我国基层单位广泛推广。

与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。ELISA方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观等缺陷。因而ELISA在丙环唑农药的快速检测上的应用受到很大的限制。

胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。而在建立能够高效、特异性检测丙环唑的免疫学检测方法时，关键在于获得灵敏度高、特异性强的抗体，如公开号为CN106596953A的中国专利提供了一种检测丙环唑的时间分辨荧光免疫分析试剂盒，是在丙环唑结构上进行改造、修饰，来合成半抗原，偶联蛋白来免疫动物，但这样会破坏丙环唑的结构，导致很难产生针对丙环唑的特异性抗体。因此，迫切需要提供一种保留丙环唑整体结构并且能够产生针对丙环唑特异性高的抗体的半抗原和抗原，同时建立一种检测高效、灵敏、特异性强、能专一检测丙环唑的免疫学检测方法。

发明内容