[发明专利]猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒

说明书

本发明提供猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒。本发明提供的用于猪δ冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒二重实时荧光定量PCR检测的引物和探针(SEQ ID NO:1‑6)，以及基于所述引物和探针建立的二重实时荧光定量PCR检测方法，可实现在一个反应中同时对两种病毒进行快速鉴别检测，可在2h内完成检测，具有快速、特异、敏感、高通量等优点，能满足大批量、快速鉴别检测猪δ冠状病毒和猪急性腹泻综合征冠状病毒的要求。

技术领域

本发明涉及核酸检测技术领域，具体地说，涉及猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒。

背景技术

冠状病毒(Coronaviruses，CoV)属于冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒亚科(Coronavirinae)，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒，拥有已知RNA病毒中最大的基因组序列长度。目前，已知的猪冠状病毒有五种，包括猪流行性腹泻病毒(porcineepidemicdiarrhea virus，PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritisvirus，TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(porcine respiratory coronavirus，PRCV)、猪凝血性脑脊髓炎病毒(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus，PHEV)、猪δ冠状病(porcine deltacoronavirus，PDCoV)以及猪急性腹泻综合征冠状病毒(Swine AcuteDiarrhea Synd rome coronavirus，SADS-CoV)。其中PEDV、TGEV、PDCoV、SADS-CoV能够引起猪的肠道疾病，导致腹泻、呕吐和脱水，发病率和死亡率可高达50％～100％，尤其是哺乳阶段仔猪发病最为严重。

猪δ冠状病又称猪丁型冠状病毒，是引起猪腹泻疾病的新发病原。是一种有囊膜的单股正链RNA病毒。该病毒可感染不同日龄的猪，主要引起呕吐、腹泻、脱水等临床症状。哺乳仔猪对其易感性较强，临床症状更加严重。目前，尚无有效疫苗用于PDCoV的防控，因此，构建快速、准确的实验室检测方法有助于该病原的及时发现与早期控制。感染PDCoV腹泻猪，症状与PEDV和传染性胃肠炎病毒(TGEV)的症状非常相似，同时临床上也出现3种病毒混合感染的现象，因此，临床上难以有效区分这些病毒病原体。

SADS-CoV引起的症状包括猪急性腹泻、失重，严重时死亡，与其他猪肠道病毒引发的腹泻症状极为相似，在临床和组织病理学上很难区分，这就给该病的确诊带来一定难度，需要借助实验室诊断技术确诊，而传统的检测方法费时费力，操作方法繁琐，不利于疾病的快速诊断治疗。

实时荧光定量PCR检测技术融合了PCR技术的核酸高效扩增、引物特异性高、光谱技术敏感性高和高精确定量的优点，直接探测PCR过程中荧光信号的变化以获得定量结果。Tagman探针法利用PCR反应中Taq酶5’端和3’端的外切酶活性将探针酶切降解，使其报告荧光基团和淬灭荧光基团分离并发出荧光，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物的形成完全同步。随着PCR地进行，所检测到的荧光信号越来越强，从而达到定量的目的。荧光定量PCR技术的出现，极大简化了定量检测的过程，结果判断更真实可靠，大大提高了工作效率。

发明内容

本发明的目的是提供猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒检测试剂盒。

本发明的另一目的是提供猪δ冠状病毒和急性腹泻综合征冠状病毒的qPCR检测方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供猪δ冠状病毒检测引物，包括如SEQID NO:1所示的上游引物和SEQ ID NO:2所示的下游引物。

本发明还提供与SEQ ID NO:1-2所示引物配套使用的探针，序列如SEQ ID NO:3所示。