[发明专利]一种扩增单细胞内核酸的方法

权利要求书

1.一种扩增单细胞内核酸的方法，其特征在于，其包括：

(1)将单个细胞捕获在皮升级至纳升级微小体积内；

(2)对所述单个细胞进行原位裂解；

(3)将扩增体系加入到微小体积内进行原位扩增。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的皮升级至纳升级微小体积为微液滴、凝胶微球或者微流控芯片中的微小反应室；

较佳地：所述微液滴含6％w/v丙烯酰胺单体和N，N'-亚甲基双丙烯酰胺以及0.3％w/v过硫酸铵溶液，所述丙烯酰胺单体和所述N，N'-亚甲基双丙烯酰胺的质量比为37.5:1；或者，所述微液滴含3％w/v琼脂糖水凝胶溶液。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述捕获通过以下方法之一实现：

1)制备单细胞悬液，将所述单个细胞捕获在微液滴中；

2)基于方法1)，将包含所述单个细胞的凝胶液滴凝固成包含所述单个细胞的凝胶微球；

3)将所述单个细胞分离捕获在单个独立的微小反应室中。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，使用方法2)时：在对所述单个细胞进行裂解后，对包含所述单个细胞基因组的凝胶微球进行清洗；优选使用无核酸酶水或TE缓冲液清洗。

5.如权利要求2～4任一项所述的方法，其特征在于，所述凝胶微球包含凝胶聚合物；

和/或，所述的凝胶微球为水凝胶微球、醇凝胶微球、气凝胶微球、硅凝胶微球、碳凝胶微球、金属凝胶微球或者无极非金属氧化物凝胶微球。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述凝胶聚合物包括热响应性聚合物或者非热响应性聚合物；

其中，所述热响应性聚合物优选琼脂糖或者明胶；所述非热响应性聚合物优选聚丙烯酰胺或者聚乙二醇的共聚物。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述裂解的方法为酶裂解法、碱裂解法、热休克法以及超声波处理法中的一种或多种。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，通过高通量微液滴技术将所述单个细胞捕获在微液滴中。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中：通过高通量微液滴技术将扩增体系加入到微小体积内。

10.如权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述扩增的方法为PCR、MDA、MALBAC或者LIANTI。