[发明专利]一种尿液中微生物核酸新型保存液

说明书

本发明公开了一种尿液中微生物核酸新型保存液，其包括如下组份：核酸酶抑制剂、三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液、防腐剂、甲醛猝灭剂、渗透剂、代谢抑制剂、丙三醇，所述尿液中微生物核酸新型保存液的pH为7～8。所述保存液能有效抑制尿液中的白细胞或者是上皮细胞裂解，同时抑制尿液中的游离核酸降解，维持游离核酸的稳定性，从而可以提高尿液检测的准确性，且所述的核酸新型保存液成分相对简单、成本低廉，同时还能够在室温条件下保持游离核酸的稳定性，非常适合在临床广泛使用。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及一种尿液中微生物核酸新型保存液。

背景技术

液态活检是直接从体液(例如血液或尿液)而不是实体组织中获得生物标记物的方法，是一种简单的非侵入性的手术活组织检查替代方法。尿液检测是分子生物学检测中常见的离体样本之一，尿液是由肾脏生成，经输尿管，膀胱排出的含有大量代谢终产物的液体。人体内各种体液与器官的关系中很少有像尿液与肾脏这般密切联系且容易获得的，可以能够动态反应肾脏和泌尿系统的变化以及其他部位的异常或疾病信息。核酸提取是各种分子生物学检测方法的基础，高效完整地提取DNA是PCR扩增、文库构建、测序等工作的基础。尿液中含有核酸，对人体来说，尿液核酸的检验与血液核酸的检验相比，更具有无创伤性。但是尿液中含有能破坏细胞内细胞器以及降解核酸的尿素、尿酸等成分，导致尿液保存时长对检测结果有直接影响。此外，相比与外周血，尿液中的核酸酶含量更高、代谢物质更多、pH范围波动较大，故尿液中游离核酸所处的生物环境相对于血液来说会更复杂。如果尿液中有白细胞或者是上皮细胞破裂基因组核酸降解进入尿液中，或者是如果尿液中的核酸酶未被抑制，分泌的核酸酶能引起DNA链发生断裂、降解，初始游离DNA将会被降解掉，达不到检测水平，也会增加了检测的背景噪音，给后续的检测带来假阴性结果。

发明内容

本发明旨在克服上述现有技术的至少一种缺陷，提供一种尿液中微生物核酸新型保存液，所述保存液能有效抑制尿液中的白细胞或者是上皮细胞裂解，同时抑制尿液中的游离核酸降解，维持游离核酸的稳定性，从而可以提高尿液检测的准确性。

本发明采取的技术方案如下：

一种尿液中微生物核酸新型保存液，包括如下组份：核酸酶抑制剂、三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液、防腐剂、甲醛猝灭剂、渗透剂、代谢抑制剂，所述尿液中微生物核酸新型保存液的pH为7～8。

本发明所述的尿液中微生物核酸新型保存液使用核酸酶抑制剂能够抑制体系中的核酸酶活性，防止尿液样本中的核酸被降解，同时还可以维持白细胞或者是上皮细胞的稳定性，避免细胞裂解；三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液能够保持尿液样本为中性或弱碱性，为尿液样本中的核酸提供相对稳定的pH值环境；防腐剂同时具有抗凝血的作用，保障血细胞不致破裂，维持其稳定性；甲醛淬灭剂主要是与游离的自由醛反应，猝灭游离甲醛等自由醛，避免其对游离核酸造成损伤，使得尿液中的核酸能够维持自身结构的稳定，同时避免了自由醛抑制聚合酶链式反应和测序过程中的酶反应；渗透剂可以较好地维持细胞渗透压，裂解进一步避免细胞裂解；代谢抑制剂能够进一步抑制游离核酸的降解，稳定尿液中的游离核酸；丙三醇可以使保存液更加稳定。本发明通过对上述各组分的合理使用，使得所制备的尿液中微生物核酸新型保存液能够快速稳定尿液样本，有效抑制核酸酶的活性，防止细胞裂解，同时可以很好的保护尿液中的游离核酸，且保存时间久。

优选地，核酸酶抑制剂为乙二胺四乙酸或乙二醇四乙酸，浓度为5～10mmol/L。

优选地，所述三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液的浓度为1～3mmol/L。

优选地，所述防腐剂为二羟甲基脲、2-溴-2-硝基丙烷-1,3-二醇、柠檬酸钠、羟甲基甘氨酸钠中的一种或多种，浓度为2～5mmol/L。

优选地，所述甲醛猝灭剂为氨基酸和含胺化合物的混合物。进一步优选地，所述甲醛猝灭剂为精氨酸、赖氨酸、甘氨酸和乙二胺的混合物，混合浓度为20～30mmol。