[发明专利]一种肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液

说明书

本发明公开了一种肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液包括处理液Ⅰ和处理液Ⅱ，其中处理液Ⅰ包括盐酸胍缓冲溶液、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂、碱金属卤化物、丙三醇，处理液Ⅱ包括碱金属氢氧化物和表面活性剂。本发明使用分开保存的处理液Ⅰ和处理液Ⅱ作为肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，可以避免保存液产生沉淀，同时也能分别针对性处理不同的干扰杂质，能够快速稳定肺泡罐洗液样本，有效抑制核酸酶的活性，防止细胞裂解，同时可以很好的保护肺泡罐洗液中的游离核酸，保存时间久，提高核酸检测准确性和便利性，在肿瘤性疾病、病毒等检测及诊断中具有极大地应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术领域，更具体地，涉及一种肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液。

背景技术

肺泡灌洗液是将纤维支气管镜直接插入气道，到达炎症或者病变部位，通过纤维支气管镜注入无菌生理盐水，并反复抽吸，最终吸出的液体。肺泡灌洗液的成分包括细胞、肺表面活性物质、炎症介质、生长因子、各种蛋质、酶类、脂类、核酸等。在临床中，肺泡灌洗液主要用于病原微生物检查，肿瘤性疾病检测及诊断等。核酸是脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的总称。随着现代分子生物学的发展，证实了核酸(包括RNA和DNA)的存在为肿瘤、病毒的研究开辟了新的领域。肺癌是当今世界各国常见的恶性肿瘤，并已经成为绝大多数国家癌症死亡的主要原因，被认为是目前对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤。游离RNA主要来源于肿瘤细胞，研究表明肺癌患者支气管肺泡灌洗液游离RNA测定对肺癌的诊断具有很大的临床意义，应用荧光定量PCR方法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中游离RNA诊断肺癌具有较高的特异性和敏感性。游离核酸具有取材广泛方便，可扩增性、无创或微创的优点，在肿瘤的诊断、疗效检测、预后判断等临床应用方面均具有较好的应用前景。然而，在肺泡灌洗液样本成分中存在一定的干扰因子，其会影响RNA测定的特异性和准确性，例如肺表面活性物质、炎症介质、生长因子、真菌的细胞壁成分(1-3)-β-D葡聚糖等。此外，在室温条件下取出肺泡灌洗液后，必需在4小时内送检。如不能及时送检，需放入4℃冰箱中保持，保存时间也仅约24h，这对肺泡灌洗液的送检时间和保存条件要求也较为苛刻，给临床检测带来了较高难度。

因此，需寻求一种提高肺泡灌洗液微生物核酸检测准确性和便利性的保存液。

发明内容

本发明旨在克服现有技术的不足，提供一种肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，所述保存液能够维持肺泡罐洗液中各成分的稳定性，提高核酸测定的特异性和准确性，且储存稳定性好。

一种肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液，包括处理液Ⅰ和处理液Ⅱ，所述处理液Ⅰ包括盐酸胍缓冲溶液、核酸酶抑制剂、代谢抑制剂、碱金属卤化物、丙三醇，处理液Ⅱ包括碱金属氢氧化物和表面活性剂。

本发明所述的肺泡灌洗液微生物核酸新型保存液的处理液Ⅰ使用核酸酶抑制剂能够抑制体系中的核酸酶活性，防止肺泡灌洗液样本中的微生物核酸被降解，同时还可以维持各种细胞的稳定性，避免细胞裂解；盐酸胍缓冲溶液能够保持肺泡灌洗液样本为碱性，为肺泡灌洗液样本中的核酸提供相对稳定的pH值环境；代谢抑制剂能够进一步抑制游离核酸的降解，稳定肺泡灌洗液中的游离核酸，碱金属卤化物能够较好地维持细胞渗透压，进一步避免细胞裂解。丙三醇可以使保存液更加稳定。处理液Ⅱ中的碱金属氢氧化物能使反应干扰因子变性，强碱使蛋白质的氢键发生断裂，同时也会与游离的氨基等形成盐，避免肺泡罐洗液中蛋白质的干扰，同时也会与游离的氨基等形成盐；表面活性剂能帮助分解蛋白酶，进一步降低肺泡灌洗液的干扰因子的影响。处理液Ⅰ和处理液Ⅱ分开保存，使用时再混合在一起，可以避免沉淀的产生，同时也能分别针对性处理不同的干扰杂质。本发明通过对上述各组分的合理使用，使得所制备的肺泡灌洗液中微生物核酸新型保存液能够快速稳定肺泡罐洗液样本，有效抑制核酸酶的活性，防止细胞裂解，同时可以很好的保护肺泡罐洗液中的游离核酸，保存时间久，能够提高核酸检测准确性和便利性，在肿瘤性疾病以及病毒等检测及诊断中具有极大地应用价值。