[发明专利]一种检测探针、其制备方法及应用

权利要求书

1.一种检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）、克隆目标基因片段，片段化minicircle质粒，得到minicircle质粒片段，所述minicircle质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述片段化的步骤包括：使用如核苷酸系列为SEQ ID NO.5~6的引物序列对minicircle质粒进行PCR扩增，扩增得到的片段为minicircle质粒片段；

（2）、将步骤（1）中的目标基因片段与minicircle质粒片段连接，并将连接产物转化至菌中，挑取相应的含有所述质粒片段的转化菌，扩大培养并提取质粒；

（3）、使用带有纯化标签的原料，以步骤（2）得到质粒为模板进行滚环扩增；

（4）、纯化回收步骤（3）的扩增产物，进行超声。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述带有纯化标签的原料为带有生物素标签的dNTP或生物素标签的NTP。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，若制备DNA探针，步骤（3）中所述滚环扩增使用Phi29DNA聚合酶；若制备RNA探针，步骤（3）中所述滚环扩增使用T7 RNA聚合酶。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中所述滚环扩增的引物的序列为如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中所述超声为将扩增产物打断至100-300bp。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述超声的参数设置为：超声30秒，停30s，共45个循环。

7.如权利要求1~6任一项所述方法制备的检测探针。

8.如权利要求7所述检测探针在制备液相捕获试剂盒中的用途。

9.一种非诊断和治疗目的的液相捕获试剂盒的使用方法，其特征在于，方法如下：

（a）、基因组DNA超声打断，加入接头，构建相应的DNA文库；

（b）、扩增步骤（a）所述的DNA文库；

（c）、使用如权利要求7所述检测探针与步骤（b）中的文库进行杂交；

（d）、通过对应纯化标签的纯化方法进行杂交产物纯化；

（e）、扩增步骤（d）中的纯化产物并上机测序。

10.如权利要求9所述的非诊断和治疗目的的液相捕获试剂盒的使用方法，其特征在于，所述探针含有生物素标签，所述纯化方法为通过链霉亲和素进行纯化。